Исследование фармакокинетики мебеверина в форме капсул с пролонгированным высвобождением

Введение

Мебеверин является миотропным спазмолитиком, механизм действия которого основан на блокаде быстрых натриевых и медленных кальциевых каналов на мембране миоцита, что замедляет её деполяризацию и препятствует сокращению мышечных волокон. Он обладает высокой селективностью в отношении гладкомышечных клеток желудочно-кишечного тракта, поэтому его используют, в основном, при спазмах различных отделов пищеварительной системы. Данный препарат обеспечивает как надёжный антиспастический эффект, так и препятствует развитию атонии (прокинетическое действие) [1].

Мебеверин, являющийся сложным эфиром, быстро гидролизуется на этапе пресистемной элиминации ферментами-эстеразами до 3,4-диметоксибензойной (вератровой) кислоты и мебеверинового спирта. Основными метаболитами данного препарата являются мебевериновая кислота (МК) и деметилмебевериновая кислота (ДММК) (рис.1) [2].

Период полувыведения ДММК при приёме капсул с пролонгированным высвобождением, по данным [1, 3], составляет 5—6 ч, максимальная концентрация в крови (Cmax) после однократного приёма составляет — 679 нг/мл, после двукратного приёма — 804 нг/мл, время достижения максимальной концентрации (Tmax) около 2,92 ч. Площадь под фармакокинетической кривой «концентрация-время» от нуля до последнего отбора крови (AUC0-t) для ДММК, согласно [3], равна 4 552 нг х ч/мл, константа элиминации равна 0,147 ч-1. Значения фармакокинетических параметров для МК не опубликованы. Поэтому получение новых данных о фармакокинетике мебеверина в форме капсул с модифицированным высвобождением является актуальным.

Известны методики количественного определения метаболитов мебеверина в плазме крови методами ВЭЖХ и ВЭЖХ-МС/МС [2-6]. Недостатками данных методик является длительная пробоподготовка с использованием твёрдофазной и жидкостно-жидкостной экстракции и низкая чувствительность.

В связи с этим целью данной работы является изучение фармакокинетики лекарственного препарата мебеверина в форме капсул (Дюспаталин) и разработка новой чувствительной и экспрессной биоаналитиче-ской методики для определения концентрации его метаболитов в плазме крови методом ВЭЖХ-МС/МС.

Материалы и методы

Для измерения концентраций метаболитов мебеверина в плазме крови использовалась ВЭЖХ- МС/МС-система, оснащённая трёхквадрупольным масс-спектрометрическим детектором Thermo Scientific TSQ Quantum Ultra. Подготовка проб осуществлялась методом осаждения белков; процедуры пробоподготовки включали внесение в образцы внутренних стандартов — мебевериновой кислоты D5(МК-D-5) и деметилированной мебевериновой кислоты-D5 (ДММК-D5) (рис. 2). Разделение компонентов биологической матрицы проводили на двух хроматографических колонках Phenomenex Luna 5uC8, (150 х 4,6 мм, 5 мкм) и Phenomenex Luna 5uC8, (150 х 4,6 мм, 5 мкм) с использованием подвижной фазы на основе ацетонитрила и формиатного буферного раствора при градиентном режиме элюирования. Масс-спектрометрический детектор работал в режиме регистрации положительных ионов последующим MRM-переходам: для МК m/z - 280—>121, для ДММК m/z - 266,2—>107, для МК-D5 m/z - 285—121, для ДММК-D5 m/z - 271—107. Время анализа составило 6 мин.

Валидация аналитической методики выполнялась в соответствии с требованиями руководств EMEA [7], FDA [8] и Руководства по экспертизе лекарственных средств НЦЭСМП (Т.1) [9]. Полученные результаты валидационных тестов представлены в табл. 1, они отвечают всем установленным критериям приемлемости. Определение концентраций обоих аналитов проводилось в диапазоне от 10 до 2 000 нг/мл. Были использованы следующие калибровочные точки:10, 50, 200, 500, 750, 1 000, 1 500, 2 000 нг/мл. Содержание определяемых веществ в образцах контроля качества составило 10, 30, 400, 800, 1 600, 2 000 нг/мл.

Исследование фармакокинетики

Исследование фармакокинетики препарата Дюспаталин проводилось в соответствии с требованиями ГОСТ Р 52379-2005 «Надлежащая клиническая практика», нормативных документов FDA [10] и EMEA [11], а также в соответствии с этическими принципами, изложенными в Хельсинкской Декларации [12].

В популяцию для оценки фармакокинетических параметров было включено 24 испытуемых в возрасте от 18 до 45 лет, в том числе 13 женщин и 11 мужчин европеоидной расы, отобранных согласно критериям включения и не включения. В скрининге приняло участие 37 кандидатов. Средний возраст добровольцев составил 25,8±7,1 лет, рост - 171,5±9,4 см, масса - 68,1±10,5 кг, ИМТ - 23,3±2,8 кг/м2.

Отбор образцов крови осуществлялся до приёма препарата и через 0,5; 1; 1,5; 2; 2,5; 3; 3,5; 4; 5; 6; 8; 10; 12 и 24 ч после приёма препарата через локтевые катетеры [3, 13]. Плазму немедленно отделяли центрифугированием и замораживают при температуре не выше — 20 °С. В связи с быстрым пресистемным метаболизмом лекарственного вещества определялись концентрации двух основных метаболитов — мебевериновой кислоты и деметилмебевериновой кислоты [1—6].

Для исследования использовался препарат Дюспаталин в форме капсул пролонгированного действия в дозировке 200 мг производства «Эбботт Хелскеа САС» (Франция) (серия 10215, годен до 04.2017).

Статистическая обработка полученных результатов проводилось с помощью пакетов программного обеспечения Rv. 3.2.1, модуль Bear (Lee, Hsin- yaandLee, Yungjin (2014). bear: Data Analysis Tool for Average Bioequivalence and Bioavailability.Rpackage version 2.6.4) и StatSoft STATISTICA v.12. Рассчитывались следующие фармакокинетические параметры:

•максимальное измеренное значение концентрации метаболитов в плазме крови (Cmax);

•время достижения максимальной концентрации (Tmax);

•площадь под фармакокинетической кривой «концентрация-время» от нуля до последнего отбора крови (AUC0-t), при котором концентрация метаболитов равна или выше нижнего LLOQ методики;

•площадь под фармакокинетической кривой, начиная с нулевого значения времени до бесконечности (AUC0-∞);

•отношение значений AUC0-t к AUC0-∞ — относительная скорость всасывания (Cmax/AUC);

•константа скорости терминальной элиминации (Kel);

•период полувыведения метаболитов (Т1/2);

•среднее время удержания метаболитов в крови (MRT).

Полученные результаты представлены в табл. 2 и проиллюстрированы на рис. 4. Среднее значение соотношения AUC0-t/AUC0-∞ для мебевериновой кислоты равнялись 88,51%, для деметилированной мебевериновой кислоты — 86,26%, что указывает на достаточную длительность наблюдения. Средние значения максимальных концентраций МК и ДММК, определяемых в плазме крови добровольцев, составили 62,52+35,01 и 291,81 + 125,92 нг/мл, соответственно, средние значения AUCo-t - 293,94+151,78 и 2191,85+542,94 нг х ч/мл, соответственно, средние значения Tmax — 3,27+1,03 и ,19±1,48 ч, соответственно. Таким образом, время наступления максимальной концентрации для обоих метаболитов было практически одинаковым, при этом максимальная концентрация в плазме, AUC0-t у ДММК значительно выше, чем у МК. Это может свидетельствовать о том, что большая часть МК сразу после окисления мебеверинового спирта подвергается деметилированию.

Рассчитанные фармакокинетические параметры ДММК существенно отличаются от данных ранее опубликованных исследований (табл. 3) [1—3]. Так, полученные средние значения Cmax, AUC0-t, AUC0-∞ приблизительно в 2 раза ниже, а измеренный период полувыведения на 2 ч дольше, чем по данным литературы. Это может быть связано с высокой межсубъектной вариабельностью и влиянием ситуационных факторов на процесс гидролиза лекарственного вещества на пресистемном этапе.

Выводы

Таким образом, разработана и валидирована новая экспрессная, точная и чувствительная ВЭЖХ-МС/ МС-методика количественного определения основных метаболитов мебеверина в плазме крови человека, отвечающая всем необходимым требованиям, изложенным в руководствах EMEA, FDA и НЦЭСМП. Предел количественного определения для МК и ДММК составил 10 нг/мл. В результате проведённого с использованием данной методики исследования фармакокинетики капсул в дозировке 200 мг были получены новые данные о фармакокинетических параметрах мебевериновой и деметилмебевериновой кислот, которые могут быть использованы для разработки дизайна исследований биоэквивалентности.