Тропоксин в эффективной дозе у крыс не оказывает влияния на активность изоформ CYP2С9 и CYP1А2 цитохрома P450

Введение

Одной из наиболее важных метаболизирующих ферментных систем в организме человека является система цитохрома Р450 (CYP), которая отвечает за окислительный метаболизм многочисленных эндогенных веществ и ксенобиотиков [8]. У людей около 90 % лекарств и ксенобиотиков в первую очередь метаболизируются изоферментами семейств CYP1, CYP2, CYP3 и CYP4 [9]. Многие лекарственные препараты могут влиять на активность изоформ цитохрома P450, являясь либо его ингибиторами, либо индукторами, что может лежать в основе межлекарственного взаимодействия, и требует учёта при сочетанной фармакотерапии [5].

В ФГБНУ «НИИ фармакологии имени В.В. Закусова» разработано лекарственное средство (ЛС) из группы производных оксима тропинона, обладающее про- тивомигреневой антисеротониновой активностью – тропоксин [1, 3, 4]. Влияние новых ЛС на изоформы цитохрома Р450 необходимо оценивать уже на доклиническом этапе, поэтому целью настоящего исследования явилась оценка влияния тропоксина на изменение активности изофермента CYP2C9 и CYP1A2 в дозе 30 мг/кг (в течение 4 дней, трёхкратно через каждые 3 ч). Дополнительно изучено влияние эффективной дозы тропоксина на изменение активности изофермента CYP2C9 при разной длительности введения препарата (3- и 4-дневное введение).

Материалы и методы

Изучение влияния тропоксина на изменение активности изоформы CYP2C9 после его введения в эффективной дозе

В настоящем исследовании оценивали влияние тропоксина в эффективной дозе 30 мг/кг при введении препарата в течение 4 дней, трёхкратно через каждые 3 ч. Выбор дозы основывался на результатах ранее проведённых исследований антимигренозной активности и экспериментальных данных фармакокинетики тропоксина у крыс [2].

Индуцирующий или ингибирующий эффект тропоксина оценивали по величинам метаболических отношений (МО) препарата-маркера. Под «МО» понимали отношение концентрации метаболита лозартана (Е-3174) и кофеина (теобромина и параксантина) к концентрации исходного соединения в суточной моче.

На данном этапе исследования определяли МО (Е-3174/лозартан) после введения лозартана без тропоксина (контроль; I) в сравнении с введением лозартана на фоне 4-дневного введения тропоксина в дозе 30 мг/кг – II.

Крысам вводили сначала перорально лозартан (контроль), затем по истечении 4 сут этим же животным вводили в/б тропоксин в течение 4 дней, трёхкратно через каждые 3 ч (субхроническое введение). Лозартан животным вводили через 30 мин после последнего введения тропоксина.

Препарат-маркер лозартан вводили в дозе 30 мг/кг. Крыс помещали в индивидуальные клетки со свободным доступом к воде. У каждой крысы собирали суточную мочу. Анализ проб мочи животных проводили с использованием ВЭЖХ с флуориметрическим детектированием. Методики экстракции и количественного определения исследуемых веществ описаны Прониной О.Г. и соавт. [7].

Изучение влияния длительности введения крысам тропоксина в дозе 30 мг/кг на изменение активности изоформы CYP2C9

Исследования проводили на 2 группах крыс. В каждую группу входило по 8 животных. Субхроническое 3-дневное введение тропоксина – группа I и субхроническое 4-дневное введение тропоксина – группа II. Крысам I группы сначала вводили перорально лозартан (контроль), затем по истечении 3 сут этим же животным вводили в/б тропоксин в течение 3 дней, трёхкратно через каждые 3 ч. Крысам II группы сначала вводили лозартан (контроль), затем по истечении 3 сут этим же животным вводили в/б тропоксин в течение 4 дней, трёхкратно через каждые 3 ч. Лозартан в дозе 30 мг/кг животным обеих групп вводили через 30 мин после последнего введения тропоксина.

Изучение влияния тропоксина на изменение активности изофермента цитохрома P450 CYP1А2 по данным экскреции с мочой

На данном этапе исследования определяли МО (теобромин/кофеин и параксантин/кофеин) после введения кофеина без тропоксина (контроль; I) в сравнении с введением кофеина на фоне 4-дневного введения тропоксина в дозе 30 мг/кг – II.

Крысам вводили сначала перорально кофеин (контроль), затем по истечении 4 сут этим же животным вводили в/б тропоксин в течение 4 дней, трёхкратно через каждые 3 ч (субхроническое введение). Кофеин животным вводили через 30 мин после последнего введения тропоксина.

Препарат-маркер кофеин вводили животным в дозе 50 мг/кг. Крыс помещали в индивидуальные клетки со свободным доступом к воде. У каждой крысы собирали суточную мочу. Анализ проб мочи животных проводили с использованием ВЭЖХ с УФ-детектированием. Методики экстракции и количественного определения исследуемых веществ подробно описаны Новицкой и соавт. [6].

Достоверность различий между величинами МО после введения препаратов-маркеров (лозартана и кофеина) без тропоксина (контроль) и на фоне субхронического введения тропоксина оценивали с помощью парного t-критерия Стьюдента.

Результаты и их обсуждения

На рис. 1 представлены отношения концентраций метаболита к препарату-маркеру в суточной моче крыс, т. е. МО после введения крысам лозартана без тропоксина (контроль; I) и введения лозартана на фоне субхронического введения тропоксина в дозе 30 мг/кг (II). Так, после введения лозартана без тро- поксина МО составило 1,70 ± 0,67, а после введения лозартана на фоне субхронического введения тропоксина – 2,12 ± 0,81.

При сравнении величин МО (Е-3174/лозартан) после введения лозартана без тропоксина (контрольная группа) и после введения лозартана на фоне 4-дневного введения тропоксина статистически значимые различия не выявлены (p < 0,05).

На рис. 2 представлены значения МО, полученные в контрольных группах в сравнении с аналогичными параметрами, полученными после введения лозартана на фоне 3- и 4-дневного введения тропоксина. При сравнении величин МО не выявлены статистически значимые различия в контрольных группах в сравнении с введением лозартана на фоне 3- и 4-дневного введения тропоксина (р < 0,05). МО в контрольной группе составило 2,06 ± 1,01, а после субхронического 3-дневного введения тропоксина – 2,04 ± 1,09. Результаты 4-дневного эксперимента показали, что МО в контроле составило 1,70 ± 0,67, а после субхронического 4-дневного введения тропоксина – 2, 12 ± 0,81.

При сравнении МО, рассчитанных после 3- и 4-дневного введения тропоксина, статистически значимые различия не были выявлены (р < 0,05). МО после субхронического 3-дневного введения тропоксина составило 2,04 ± 1,09; после 4-дневного введения – 2,12 ± 0,81. Таким образом, продолжительность введения тропоксина (3 или 4 дня) в дозе 30 мг/кг не оказывает ни ингибирующего, ни индуцирующего эффекта на изофермент CYP2C9. Также было установлено, что тропоксин в эффективной дозе не оказывал индуцирующего/ингибирующего эффекта на изофермент CYP1А2 (р < 0,05).

На рис. 3 представлены величины МО метаболита кофеина – теобромина к неизменённому веществу после введения кофеина без тропоксина и на фоне 4-дневного в/б введения тропоксина в дозе 30 мг/кг. Среднее значение МО после 4-дневного введения крысам тропоксина в эффективной дозе практически не отличалось от аналогичного параметра в контрольной группе животных. Так, МО в группе I составило 1,68 ± 1,00 и в группе II – 1,49 ± 0,91.

На рис. 4 представлены величины МО метаболита кофеина – параксантина к неизменённому веществу после введения кофеина без тропоксина (I) и на фоне 4-дневного в/б введения тропоксина в дозе 30 мг/кг (II).

Статистический анализ не выявил достоверно значимых различий между величинами МО параксантина в суточной моче животных после введения кофеина без тропоксина (I) и на фоне субхронического введения тропоксина (II). Так, для крыс из группы I этот параметр равнялся 1,70 ± 0,96 и для животных группы II – 1,88 ± 0,90, соответственно. То есть, введение кофеина на фоне 4-дневного в/б введения тропоксина в дозе 30 мг/кг не вызвало изменения активности изофермента CYP1A2.

Заключение

На крысах изучено влияние тропоксина на изменение активности изофермента цитохрома Р450 CYP2C9 (маркерный субстрат – лозартан) и CYP1A2 (маркерный субстрат – кофеин). Изучение влияния дозы 30 мг/кг на изменение активности изоферментов CYP2C9 и CYP1A2 показало, что тропоксин в эффективной дозе после 4-дневного введения (3 раза в день) не вызывает изменения активности данных изоформ. Изучение влияния продолжительности введения тропоксина в дозе 30 мг/кг на изменение активности изофермента CYP2C9 показало, что введение тропоксина в течение 3 или 4 дней не оказывает ни ингибирующего, ни индуцирующего эффекта на изофермент CYP2C9.