Перейти к:
Исследование хронической токсичности и аллергизирующих свойств инъекционной формы афобазола
Аннотация
Ключевые слова
Для цитирования:
Алексеева С.В., Сорокина А.В., Коваленко Л.П., Мирошкина И.А., Дурнев А.Д. Исследование хронической токсичности и аллергизирующих свойств инъекционной формы афобазола. Фармакокинетика и Фармакодинамика. 2016;(2):49-56.
For citation:
Alekseeva S.V., Sorokina A.V., Kovalenko L.P., Miroshkina I.A., Durnev A.D. Experimental study of chronic toxicity and allergenic properties of the drug afobazol. Pharmacokinetics and Pharmacodynamics. 2016;(2):49-56. (In Russ.)
Введение
Афобазол — 5-этокси-2-[2-(морфолино)этилтио] бензимидазола дигидрохлорид — новый отечественный препарат в таблетированной форме, обладающий селективными анксиолитическими и нейропротекторными свойствами, разработан в ФГБНУ «НИИ фармакологии им. В.В. Закусова» (Гос. регистрация № 000861) (рис. 1).
В ходе дополнительных доклинических исследований были установлены нейропротекторные свойства афобазола [1]. Данное наблюдение определило целесообразность разработки инъекционной лекарственной формы афобазола, нацеленной на лечение различных форм острого нарушения мозгового кровообращения с дальнейшей коррекцией неврологического дефекта, профилактикой и лечением неврологических и соматических осложнений. Необходимым этапом этой работы явилась доклиническая оценка безопасности инъекционной лекарственной формы афобазола.
Цель исследования
Оценка хронической токсичности афобазола, а также его аллергизирующих свойств.
Материалы и методы
В работе использована инъекционная форма афобазола — раствор для инъекций 10 мг/мл.
Хроническую токсичность афобазола оценивали на самцах и самках беспородных белых крыс массой 180—200 г и кроликах породы шиншилла массой 1,5—2 кг.
Аллергизирующие свойства афобазола исследованы в экспериментах на морских свинках альбиносах массой 250—300 г, противовоспалительные эффекты на мышах СВА массой 18—20 г.
Все животные были получены из сертифицированных питомников и содержались в условиях вивария ФГБНУ «НИИ фармакологии имени В.В. Закусова» при свободном доступе к воде и корму.
1% раствор афобазола вводили крысам внутривенно в боковую хвостовую вену 1 раз в сутки в течение двух недель в дозе, соответствующей терапевтической — 5 мг/кг и превышающей её в десять раз — 50 мг/кг. Учитывая индивидуальную чувствительность кроликов к производным 2-меркаптобензимидазола, для данного вида животных был сделан перерасчёт доз по поверхности тела. Препарат вводили 1 раз в сутки в краевую ушную вену в течение двух недель в дозе 1 мг/кг и 10 мг/кг.
При оценке аллергенности препарат использовали в дозах 5 и 50 мг/кг по стандартным схемам иммунизации.
Объём и продолжительность исследования, набор использованных методов, регистрируемых параметров и другие условия проведения исследования регламентировались соответствующим Руководством [3]. В экспериментах использовали современное лабораторное оборудование, прошедшее соответствующую поверку; электрокардиограф ЭК 1Т-03М, гемоанализатор (Лаборскель), установка «Открытое поле», прибор КФК-2МП и др.
Все анализы выполнялись до начала эксперимента и через 2 нед, не позже 24 ч после последнего введения препарата, за исключением «отставленной» группы, в которой измерения выполняли через две недели после последнего введения препарата.
Всех животных опытных и контрольных групп подвергали патологоанатомическому вскрытию с последующей оценкой микроскопической картины важнейших внутренних органов.
Изучение аллергизирующих свойств афобазола проводили согласно методическим рекомендациям [4].
Статистический анализ полученных данных проводили с использованием программы Statistica 10. Результаты выражали в виде средней арифметической и её средней ошибки, проверку данных на нормальность распределения выборок определяли по критерию Шапиро-Уилка, статистическую обработку экспериментальных данных проводили с помощью непарного t-критерию Стьюдента.
Результаты и обсуждение
Проведено изучение хронической токсичности инъекционной формы афобазола при ежедневном внутривенном введении в течение 2 недель самкам и самцам крыс в дозах 0,1; 1; 5 и 50 мг/кг, самкам и самцам кроликов в дозах 0,1; 1 и 10 мг/кг. Развёрнутое клинико-лабораторное исследование не выявило токсических эффектов препарата в дозах 0,1-5 мг/кг.
Афобазол при внутривенном введении в дозах 10 мг/кг у кроликов и 50 мг/кг у крыс вызывал кратковременные клонические судороги и нарушение координации движения. Афобазол увеличивал сегмент PQ в ЭКГ у самок, получавших препарат в дозе 50 мг/кг, что позволили предположить замедление атриовентрикулярного проведения (табл. 1).
Афобазол не оказывал существенного повреждающего действия на систему крови и не вызывал значимых изменений биохимических показателей сыворотки крови исследованных животных, за исключением статистически достоверного повышения уровня глюкозы, который снижался в «отставленной группе», общего белка в максимальных дозах, и понижения содержания мочевины у крыс в дозе 50 мг/кг (табл. 2). Афобазол не вызывал значительных изменений физико-химических свойств мочи.
При изучении аллергизирующих свойств инъекционной формы афобазола было установлено, что его введение в дозе 5 мг/кг приводило к незначительному усилению реакции общей анафилаксии у животных опытной группы на белок куриного яйца (БКЯ), введение в дозе 50 мг/кг подавляло реакцию общей анафилаксии. Дополнительная оценка анафилатогенной активности афобазола при его 3-кратной иммунизации препаратом в дозе 5 мг/кг по стандартной схеме не выявила развития анафилактоидной реакций после введения разрешающей дозы препарата.
При иммунизации морских свинок афобазолом в дозах 5 и 50 мг/кг в смеси с полным адъювантом Фрейнда аллергических реакций замедленного типа не обнаружено.
Установлено, что афобазол в исследуемых дозах при однократном внутривенном введении мышам линии СВА вызывает выраженное подавление реакции воспаления на конканавалин А, что свидетельствует о наличии у афобазола противовоспалительной активности, характерной для производных 2-меркапто- бензимидазола (табл. 3).
Таким образом, 2-недельное изучение хронической токсичности инъекционной формы афобазола при внутривенном введении не выявило токсических эффектов в терапевтических дозах 0,1 и 1 мг/кг у крыс и у кроликов (как наиболее восприимчивого к производным 2-меркаптобензимидазола вида) в дозе 0,1 мг/кг. Афобазол при внутривенном введении в дозах 10 и 50 мг/кг вызывает кратковременные клонические судороги и нарушение координации движения, увеличивает сегмент PQ у самок крыс, повышает уровень глюкозы и общего белка у лабораторных животных, и понижает содержание мочевины в сыворотке крови у крыс.
Исследование аллергизирующих свойств афобазола показало, что афобазол в дозах 5 и 50 мг/кг не вызывает аллергических реакций немедленного и замедленного типа и псевдоаллергических реакций. Незначительное усиление аллергической реакции на чужеродный белок при введении афобазола указывает на возможность индивидуальной чувствительности у лиц с белковой сенсибилизацией.
Список литературы
1. Середенин С.Б., Крайнева В.А. Нейропротекторные свойства афобазола при экспериментальном моделировании геморрагического инсульта. Экcпеpиментальная и клиническая фаpмакология. 2009; 72: 1: 24-28.
2. Грушевская Л.Н., Авдюнина Н.И., Милкина С.Е. и др. Разработка методик анализа инъекционной лекарственной формы афобазола. Химико-фармацевтический журнал. 2010; 44: 7: 49.
3. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под общей редакцией Р.У. Хабриева, М.: Медицина, 2005; 827.
4. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Методические рекомендации по оценке аллергизирующих свойств лекарственных средств. М.: 2012; 51-63.
5. Хлопушина Т.Г., Кринская А.В., Коваленко Л.П. и др. Влияние зиксорина на фармакокинетику антипирина у интактных и сенсибилизированных морских свинок - Бюл. экспер. биол. 1991; 7: 67-69.
6. Международные рекомендации по проведению медико-биологических исследований с использованием животных // Совет международных медицинских организаций. М.: 2000.
7. Kimber I., Kerkvliet N.I., Taylor S.L. et al. Toxicology of protein allergenicity: prediction and characterization-Toxicol. Sci. 1999; 48: 157-162.
8. Аллергология и иммунология: национальное руководство / Под ред. Р.М. Хаитова, Н.И. Ильиной. М.: ГЭОТАР- Медиа, 2009; 656.
9. Клинические рекомендации. Аллергология / Под ред. Р.М. Хаитова, Н.И. Ильиной. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2006; 240.
10. Паттерсон Р., Грэммер Л.К., Гринбергер П.А. Аллергические болезни: диагностика и лечение / Перевод с англ. / Под ред. акад. РАМН А.Г. Чучалина (гл. ред.), И.С. Гущина (отв. ред.). М.: ГЭОТАР -Медиа, 2000; 768.
Об авторах
С. В. АлексееваРоссия
А. В. Сорокина
Россия
Л. П. Коваленко
Россия
И. А. Мирошкина
Россия
А. Д. Дурнев
Россия
Рецензия
Для цитирования:
Алексеева С.В., Сорокина А.В., Коваленко Л.П., Мирошкина И.А., Дурнев А.Д. Исследование хронической токсичности и аллергизирующих свойств инъекционной формы афобазола. Фармакокинетика и Фармакодинамика. 2016;(2):49-56.
For citation:
Alekseeva S.V., Sorokina A.V., Kovalenko L.P., Miroshkina I.A., Durnev A.D. Experimental study of chronic toxicity and allergenic properties of the drug afobazol. Pharmacokinetics and Pharmacodynamics. 2016;(2):49-56. (In Russ.)