И.И. Ми­рош­ни­чен­ко1*

1 - Фе­дераль­ное го­сударс­твен­ное бюд­жетное уч­режде­ние «На­уч­ный центр пси­хичес­ко­го здо­ровья» РАМН, 115521, Рос­сия, г. Мос­ква, Ка­шир­ское шос­се, д. 34

Ре­зюме. Статья рас­смат­ри­ва­ет прик­ладные ас­пекты фар­ма­коки­нети­чес­ких ис­сле­дова­ний, свя­зан­ных с раз­ра­бот­кой но­вых ле­карс­твен­ных средств. Пред­став­ле­ны ре­зуль­та­ты из­ме­нения зна­чений па­рамет­ров фар­ма­коки­нети­ки про­цес­сов вса­сыва­ния, рас­пре­деле­ния, ме­табо­лиз­ма и эли­мина­ции ак­тивно­го ин­гре­ди­ен­та на эта­пах док­ли­ничес­ко­го и кли­ничес­ко­го изу­чения пре­пара­та. При­веде­ны срав­ни­тель­ные ха­рак­те­рис­ти­ки ана­лиза со­дер­жа­ния мик­ро­коли­честв ле­карс­твен­ных ве­ществ в би­оло­гичес­ких об­разцах.

Клю­чевые сло­ва: фар­ма­коки­нети­ка, АР­МЭ, би­одос­тупность, ВЭЖХ, им­му­нофер­мен­тный ана­лиз, масс-спек­тро­мет­рия.

ROLE AND PLACE OF PHARMACOKINETICS IN NEW DRUG DEVELOPMENT

I.I. Miroshnichenko1

1 - Mental Health Research Center of RAMS, 34, Kashirskoye shosse, Moscow, 115522, Russia

Abstract. The paper devoted to practical aspects of pharmacokinetic investigation in couple with new drug development. The changes of drug absorption, distribution, metabolism and elimination described both preclinical and clinical stages. This article also focuses on technologic methods for improving drug development efficiency including mass spectroscopy and enzyme-linked immunosorbent assay.

Keywords: pharmacokinetics, ADME, bioavailability, HPLC, immunoassay, mass spectroscopy.

ВВЕ­ДЕНИЕ

Про­цесс соз­да­ния но­вых ле­карс­твен­ных средств (ЛС) пред­став­ля­ет со­бой слож­ную и тру­до­ем­кую за­дачу, в ре­шении ко­торой за­дей­ство­ваны це­лые кол­лекти­вы уче­ных. В пер­вом приб­ли­жении по­иск но­вых пре­пара­тов вклю­ча­ет в се­бя две ста­дии: от­кры­тие и раз­ра­бот­ку.

От­кры­тие пред­став­ля­ет со­бой в пер­вую оче­редь син­тез но­вого ле­карс­твен­но­го ве­щес­тва (ЛВ). В даль­ней­шем про­водит­ся оп­ре­деле­ние фар­ма­коло­гичес­кой ак­тивнос­ти, иден­ти­фика­ция ак­ту­аль­ных би­оми­шеней для вы­сокоп­ро­из­во­дитель­но­го скри­нин­га ве­ществ-кан­ди­датов (ВК) [1]. При хи­мичес­ком син­те­зе при­меня­ют­ся два ос­новных под­хо­да: ком­би­натор­ная хи­мия и па­рал­лель­ный син­тез [2]. Под скри­нин­гом под­ра­зуме­ва­ют оп­ти­мизи­рован­ную ав­то­мати­чес­кую про­цеду­ру, пос­редс­твом ко­торой боль­шое ко­личес­тво хи­мичес­ких со­еди­нений про­веря­ет­ся на аф­финность или ак­тивность по от­но­шению к ми­шени (как пра­вило, ре­цеп­то­ры или фер­менты).

При раз­ра­бот­ке про­водит­ся оцен­ка эф­фектив­ности и бе­зопас­ности ВК. На дан­ном эта­пе це­лесо­об­разно про­водить фар­ма­коки­нети­чес­кие ис­сле­дова­ния. Дан­ные ис­сле­дова­ния не­об­хо­димы, так как боль­шое ко­личес­тво по­тен­ци­аль­но ак­тивных ве­ществ с хо­рошей ак­тивностью in vitro и эф­фектив­ностью при скринин­ге по­том ока­зыва­ют­ся не­сос­то­ятель­ны­ми, пос­коль­ку они ли­бо об­ла­да­ют не­дос­та­точ­ной би­одос­тупностью, ли­бо об­ла­да­ют неп­ри­ем­ле­мой дли­тель­ностью дей­ствия. Не­жела­тель­ные ки­нети­чес­кие свой­ства [пло­хая аб­сор­бция, слиш­ком боль­шой или, на­обо­рот, ко­рот­кий пе­ри­од по­лувы­веде­ния (Т1/2) из ор­га­низ­ма, ин­тенсив­ный ме­табо­лизм при пер­вичном про­хож­де­нии че­рез пе­чень] при­водят к от­се­ву ВК на ран­них ста­ди­ях раз­ра­бот­ки [3, 4].

ИЗУ­ЧЕНИЕ ФАР­МА­КОКИ­НЕТИ­КИ

Фар­ма­коки­нети­ка (ФК) вклю­ча­ет в се­бя клас­си­чес­кую тет­ра­ду: про­цес­сы аб­сор­бции, рас­пре­деле­ния, ме­табо­лиз­ма и эли­мина­ции (АР­МЭ). За­час­тую фар­ма­коки­нети­чес­кие и ток­си­коло­гичес­кие ис­сле­дова­ния про­водят­ся од­новре­мен­но (АР­МЭТ). При этом на каж­дом эта­пе раз­ра­бот­ки ФК мо­жет ока­зать су­щес­твен­ную по­мощь или внес­ти кор­ректи­вы в раз­ра­бот­ку но­вого по­тен­ци­аль­но­го ле­карс­тва [5].

Аб­сор­бция ве­щес­тва нап­ря­мую за­висит от про­хож­де­ния его че­рез ки­шеч­ную стен­ку. Кро­ме про­цес­сов диф­фу­зии не­об­хо­димо учи­тывать вклад тран­спортных бел­ков. Р-гли­коп­ро­те­ины пре­пятс­тву­ют вса­сыва­нию ЛВ в ки­шеч­ни­ке, про­ник­но­вению че­рез гис­то­гема­тичес­кие барь­еры и спо­собс­тву­ют вы­веде­нию пре­пара­тов и их ме­табо­литов с желчью и мо­чой. При изу­чении про­цес­сов аб­сор­бции in vivo прак­ти­чес­ки ис­сле­ду­ет­ся би­одос­тупность пре­пара­та, пос­коль­ку вос­хо­дящая фа­за ки­нети­чес­кой кри­вой при пе­рораль­ном вве­дении от­ра­жа­ет два про­цес­са: вса­сыва­ние в сис­темный кро­воток и пре­сис­темный ме­табо­лизм. По­выше­ние ли­пофиль­нос­ти со­еди­нения при­водит к улуч­ше­нию его про­ник­но­вения че­рез ли­пид­ный мо­нос­лой мем­бран, что при­водит, со­от­ветс­твен­но, к улуч­ше­нию его вса­сыва­емос­ти. С дру­гой сто­роны, с по­выше­ни­ем ли­пофиль­нос­ти ЛВ пре­сис­темный ме­табо­лизм так­же уси­лива­ет­ся; кро­ме то­го, при этом про­ис­хо­дит сни­жение рас­тво­римос­ти ЛВ в со­дер­жи­мом ки­шеч­ни­ка. По­это­му не­об­хо­дим ра­зум­ный ба­ланс рас­тво­римос­ти для каж­до­го кон­крет­но­го ве­щес­тва. В на­чаль­ной ста­дии раз­ра­бот­ки ЛС по­выше­ние гид­ро­филь­нос­ти со­еди­нения при­вело к ус­пешной раз­ра­бот­ке та­ких ин­ги­бито­ров ВИЧ-про­те­азы, как ин­ди­навир [6] и ри­тона­вир [7].

На­ряду с изу­чени­ем ди­нами­ки кон­цен­тра­ции ле­карс­твен­но­го ве­щес­тва в плаз­ме (сы­ворот­ке) кро­ви не­об­хо­димо ис­сле­довать его рас­пре­деле­ние в тка­нях. При вы­пол­не­нии это­го ис­сле­дова­ния мож­но ог­ра­ничить­ся од­ним ви­дом жи­вот­ных. Вы­бор тка­ней осу­щест­вля­ет­ся с уче­том осо­бен­ностей их кро­вос­набже­ния. В ка­чес­тве силь­но вас­ку­ляри­зиро­ван­ных тка­ней мож­но ис­поль­зо­вать, нап­ри­мер, сер­дце или се­лезен­ку, уме­рен­но вас­ку­ляри­зиро­ван­ных – ткань мышц, сла­бо вас­ку­ляри­зиро­ван­ных – саль­ник, ко­жу или кос­ти. Кро­ме то­го, не­об­хо­димы дан­ные по рас­пре­деле­нию ЛВ в ор­га­нах, обес­пе­чива­ющих эли­мина­цию (пе­чень, поч­ки), и в зо­не по­тен­ци­аль­но­го дей­ствия (нап­ри­мер, ткань лег­ко­го, ес­ли хи­ми­оте­рапев­ти­чес­кое средс­тво пред­по­лага­ет­ся при­менять при пнев­мо­нии, или ткань го­лов­но­го моз­га, ес­ли его пред­по­лага­ет­ся при­менять при ме­нин­ги­тах, и т.д.). Ито­гом изу­чения рас­пре­деле­ния ЛВ в тка­нях яв­ля­ет­ся вы­яв­ле­ние тех из них, в ко­торые оно ин­тенсив­но про­ника­ет или в ко­торых дли­тель­но удер­жи­ва­ет­ся, что мо­жет иметь су­щес­твен­ное зна­чение для фар­ма­коди­нами­чес­ких ис­сле­дова­ний. Ско­рость и сте­пень зах­ва­та пре­пара­тов тка­нями ор­га­низ­ма кон­тро­лиру­ет­ся раз­личны­ми фак­то­рами, к ко­торым от­но­сят­ся ско­рость по­тока кро­ви че­рез ор­ган, объ­ем тка­ни, свя­зыва­ние ве­щес­тва с бел­ка­ми кро­ви и ко­эф­фи­ци­ент рас­пре­деле­ния ве­щес­тва меж­ду плаз­мой и тканью. В свою оче­редь, ко­эф­фи­ци­ент рас­пре­деле­ния так­же за­висит от це­лого ря­да фак­то­ров, сре­ди ко­торых ве­дущи­ми яв­ля­ют­ся фи­зико-хи­мичес­кие свой­ства ве­щес­тва [8].

При рас­пре­деле­нии учи­тыва­ет­ся та­кой по­каза­тель, как свя­зыва­ние с бел­ка­ми. Очень вы­сокая сте­пень свя­зыва­ния с бел­ка­ми не яв­ля­ет­ся хо­рошим прог­но­зиру­ющим фак­то­ром, пос­коль­ку до­ля сво­бод­но­го ве­щес­тва ма­ла, и не­боль­шой дис­ба­ланс вне­сет со­вер­шенно не­нуж­ные ко­леба­ния кон­цен­тра­ций в ор­га­низ­ме при ле­карс­твен­ной те­рапии.

Ме­табо­лизм – очень су­щес­твен­ный фак­тор. Боль­шинс­тво пре­пара­тов под­верга­ет­ся би­от­ран­сфор­ма­ции, в ре­зуль­та­те ко­торой об­ра­зу­ют­ся ме­табо­литы, в том чис­ле об­ла­да­ющие би­оло­гичес­кой ак­тивностью. Ис­сле­дова­ние про­цес­сов би­от­ран­сфор­ма­ции осо­бен­но ак­ту­аль­но в слу­чае ЛВ с ак­тивны­ми ме­табо­лита­ми, свой­ства ко­торых мо­гут от­ли­чать­ся от ис­ходно­го ве­щес­тва: ФК – су­щес­твен­ные раз­ли­чия в ве­личи­не кли­рен­са и объ­ема рас­пре­деле­ния от по­каза­телей ис­ходно­го ЛВ; фар­ма­коди­нами­ка (ФД) – от схо­жего ме­ханиз­ма дей­ствия до раз­ли­чия, вплоть до ан­та­гониз­ма с ис­ходным ЛВ. Сле­дова­тель­но, изу­чение свой­ств ак­тивных ме­табо­литов не­об­хо­димо для оцен­ки ток­сичнос­ти и те­рапев­ти­чес­кой эф­фектив­ности ис­сле­ду­емо­го ле­карс­твен­но­го средс­тва. В иде­але изу­чение ме­табо­лиз­ма сле­ду­ет про­вес­ти на эта­пе док­ли­ничес­ко­го изу­чения. Ин­тенсив­ный ме­табо­лизм в об­щем слу­чае рас­смат­ри­ва­ет­ся как не­дос­та­ток, пос­коль­ку умень­ша­ет сис­темное воз­дей­ствие пре­пара­та и сни­жа­ет пе­ри­од по­лувы­веде­ния. Раз­ра­бота­ны сле­ду­ющие кон­цепции ре­гуля­ции ме­табо­лиз­ма: «хард драг» (hard drug), ког­да ве­щес­тво сов­сем не ме­табо­лизи­ру­ет­ся, и «софт драг» (soft drug), ког­да путь би­от­ран­сфор­ма­ции со­вер­шенно чет­ко очер­чен и фар­ма­коло­гичес­ки ак­тивное средс­тво под­верга­ет­ся пред­ска­зу­емо­му ме­табо­лиз­му с об­ра­зова­ни­ем не­ак­тивных и не­ток­сичных про­дук­тов рас­па­да [9]. Глав­ная за­дача – из­бе­жать окис­ли­тель­ных ре­ак­ций фа­зы I ме­табо­лиз­ма ксе­ноби­оти­ков, ко­торые ка­тали­зиру­ют­ся ци­тох­ро­мом Р450 и ха­рак­те­ризу­ют­ся зна­читель­ны­ми меж­ви­довы­ми раз­ли­чи­ями и по­лимор­физмом.

Все вы­шес­ка­зан­ное, ра­зуме­ет­ся, не ка­са­ет­ся про­лекарств, где ме­табо­лизм яв­ля­ет­ся не­об­хо­димым ус­ло­ви­ем выс­во­бож­де­ния ак­тивно­го ин­гре­ди­ен­та. Так, нап­ри­мер, эна­лап­рил – про­лекарс­тво, из ко­торо­го в пе­чени пу­тем гид­ро­лиза об­ра­зу­ет­ся ак­тивный ме­табо­лит эна­лап­ри­лат, бла­года­ря фар­ма­коло­гичес­кой ак­тивнос­ти ко­торо­го ре­али­зу­ет­ся ги­потен­зивное дей­ствие пре­пара­та. При при­еме внутрь око­ло 60% эна­лап­ри­ла аб­сорби­ру­ет­ся из ЖКТ, тог­да как би­дос­тупность эна­лап­ри­лата ме­нее 10% [10].

При изу­чении про­цес­сов эли­мина­ции не­об­хо­димо оце­нить экс­кре­цию ле­карс­твен­но­го ве­щес­тва с мо­чой, желчью, фе­кали­ями. Важ­ной осо­бен­ностью та­кого ис­сле­дова­ния яв­ля­ет­ся ха­рак­те­рис­ти­ка ско­рос­ти экс­кре­ции (от­но­шение ко­личес­тва ве­щес­тва, вы­делен­но­го за фик­си­рован­ный про­межу­ток вре­мени, к его про­дол­жи­тель­нос­ти в раз­личные пе­ри­оды пос­ле вве­дения пре­пара­та) и/или ку­муля­тив­ной экс­кре­ции (сум­марное ко­личес­тво ле­карс­твен­но­го ве­щес­тва, вы­делив­ше­еся с дан­ным ви­дом экс­кре­та, за весь пе­ри­од наб­лю­дения). Та­ким об­ра­зом, при ана­лизе ки­нети­ки экс­кре­ции сле­ду­ет опе­риро­вать не зна­чени­ями кон­цен­тра­ции ле­карс­твен­но­го ве­щес­тва в экс­кре­те, а про­из­ве­дени­ями кон­цен­тра­ции на объ­ем экс­кре­та за со­от­ветс­тву­ющий пе­ри­од вре­мени. Не­зави­симо от осо­бен­ностей ана­лиза дан­ных (по ско­рос­ти экс­кре­ции или по ку­муля­тив­ной экс­кре­ции) сбор экс­кре­та, со­дер­жа­щего ле­карс­твен­ное ве­щес­тво, дол­жен про­водить­ся пор­ци­он­но [11].

Основ­ной по­каза­тель эли­мина­ции – пе­ри­од по­лувы­веде­ния, ко­торый ра­вен от­но­шению объ­ема рас­пре­деле­ния к кли­рен­су ис­ходно­го ве­щес­тва. Поэ­то­му, ког­да не­об­хо­димо уд­ли­нить пе­ри­од по­лувы­веде­ния, мож­но или уве­личить объ­ем рас­пре­деле­ния, или умень­шить кли­ренс, пос­леднее прак­ти­ку­ет­ся ча­ще и осу­щест­вля­ет­ся пу­тем со­от­ветс­тву­ющей мо­дифи­кации мо­леку­лы. По­доб­ный под­ход ре­али­зован при соз­да­нии ам­ло­дипи­на: мо­дифи­кация мо­леку­лы ни­феди­пина (Т1/2 око­ло 2 ч) пу­тем при­со­еди­нения ал­ки­ламид­ной бо­ковой це­пи при­вела к сни­жению кли­рен­са и рез­ко­му уве­личе­нию Т1/2 ам­ло­дипи­на (бо­лее 30 ч) [12].

Би­одос­тупность ле­карс­твен­но­го пре­пара­та при вне­сосу­дис­том вве­дении оп­ре­деля­ют в срав­не­нии с дру­гой (как пра­вило, стан­дар­тной) ле­карс­твен­ной фор­мой. Изу­ча­емая ле­карс­твен­ная фор­ма но­сит наз­ва­ние тест-пре­пара­та, стан­дар­тная фор­ма – ре­ференс-пре­пара­та или пре­пара­та срав­не­ния. В тех слу­ча­ях, ког­да пре­парат срав­не­ния вво­дит­ся внут­ри­вен­но, мы име­ем де­ло с аб­со­лют­ной би­одос­тупностью. При фар­ма­коки­нети­чес­ком срав­не­нии тест-пре­пара­та, при­нято­го внутрь, и рас­тво­ра это­го же пре­пара­та или ле­карс­твен­ной фор­мы приз­нанно­го и за­регис­три­рован­но­го в Рос­сии ре­ференс-пре­пара­та поль­зу­ют­ся по­няти­ем от­но­ситель­ной би­одос­тупнос­ти. Уве­личе­ние би­одос­тупнос­ти сле­ду­ет рас­смат­ри­вать как дос­то­инс­тво ис­сле­ду­емо­го ЛС, пос­коль­ку это эк­ви­вален­тно по­выше­нию до­зы пре­пара­та. Эф­фект пер­вично­го про­хож­де­ния че­рез пе­чень и обус­ловлен­но­го этим пре­сис­темно­го ме­табо­лиз­ма ЛВ мож­но оце­нить пу­тем срав­не­ния пло­щадей под кри­вой (AUC) пос­ле вве­дения ЛВ в бед­ренную ве­ну (сис­темный кро­воток) и пор­таль­ную ве­ну (че­рез пе­чень).

Та­ким об­ра­зом, оп­ре­деле­ние по­каза­телей АР­МЭ на ран­них ста­ди­ях раз­ра­бот­ки поз­во­ля­ет вы­явить пер­спек­тивные ВК, со­от­ветс­тву­ющую до­зиров­ку, спо­собы вве­дения и при­мене­ния, срок год­ности ле­карс­твен­но­го пре­пара­та. Это поз­во­ля­ет су­щес­твен­но сок­ра­тить вре­мя, про­ходя­щее от от­кры­тия до ре­гис­тра­ции но­вого пре­пара­та. Вза­имо­дей­ствие хи­миков-син­те­тиков и фар­ма­коки­нети­ков поз­во­ля­ет оп­ти­мизи­ровать про­цесс соз­да­ния но­вого ЛС. Хо­рошим при­мером нап­равлен­но­го под­хо­да к раз­ра­бот­ке ЛС с при­ем­ле­мыми ФК-ха­рак­те­рис­ти­ками слу­жит флу­кона­зол. В свое вре­мя уси­лия кор­по­рации Pfizer по соз­да­нию но­вого ан­ти­фун­галь­но­го аген­та при­вели к по­яв­ле­нию ти­око­назо­ла. К со­жале­нию, пре­парат при­менял­ся толь­ко мес­тно вви­ду ма­лой би­одос­тупнос­ти, обус­ловлен­ной эф­фектом пер­вично­го про­хож­де­ния че­рез пе­чень. К то­му же ти­око­назол ин­тенсив­но свя­зывал­ся с бел­ка­ми плаз­мы кро­ви, и низ­кая кон­цен­тра­ция сво­бод­но­го ве­щес­тва сни­жала эф­фектив­ность пре­пара­та. Бы­ли пред­при­няты по­пыт­ки умень­шить ли­пофиль­ность пре­пара­та пу­тем за­мены ими­дазо­ла три­азо­лом. По­лучен­ное про­межу­точ­ное со­еди­нение об­ла­дало от­личны­ми ФК-ха­рак­те­рис­ти­ками, но в то же вре­мя про­яв­ля­ло ге­пато­ток­сичность на гры­зунах, обус­ловлен­ную на­личи­ем 2,4-дих­лорфе­нила. При за­мене хло­ра на фтор и был соз­дан ис­ко­мый пре­парат флу­кона­зол [13].

Тра­дици­он­но про­цес­сы АР­МЭ до кли­ники изу­ча­ют­ся in vivo в эк­спе­римен­тах на ла­бора­тор­ных жи­вот­ных. Ос­но­вани­ем для по­доб­но­го под­хо­да слу­жит ге­нети­чес­кое сходс­тво мле­копи­та­ющих и вы­тека­ющая от­сю­да схо­жая фи­зи­оло­гичес­кая ре­ак­ция че­лове­чес­ко­го ор­га­низ­ма на вве­дение пре­пара­та. Вви­ду ог­ра­ниче­ния вре­мени на про­веде­ния ис­сле­дова­ния и на­личия не­боль­шо­го ко­личес­тва ВК изу­чение ФК про­водит­ся на 1-2 ви­дах жи­вот­ных. По­это­му пра­виль­ный вы­бор ви­да жи­вот­ных и раз­ра­бот­ка в сжа­тые сро­ки адек­ватно­го ме­тода ко­личес­твен­но­го оп­ре­деле­ния ВК ста­новит­ся кри­тичес­ким пун­ктом в ис­сле­дова­нии – хо­роший пре­парат мо­жет быть от­вер­гнут из-за неп­ра­виль­но­го вы­бора объ­ек­та ис­сле­дова­ния или пло­хого ме­тоди­чес­ко­го под­хо­да. Це­лесо­об­разно при­менять од­ни и те же ви­ды жи­вот­ных для ФК-, ФД- и ток­си­коло­гичес­ких ис­сле­дова­ний.

С точ­ки зре­ния ор­га­низа­ции про­веде­ния ис­сле­дова­ния для уве­личе­ния про­из­во­дитель­нос­ти ФК при­меня­ют­ся та­кие под­хо­ды, как кас­сетный пул об­разцов и вре­мен­ной пул. Кас­сетный пул: нес­коль­ко ВК, как пра­вило, од­но­го го­моло­гичес­ко­го ря­да, вво­дят­ся од­но­му жи­вот­но­му од­новре­мен­но (в од­ном фла­коне). Од­но из этих ве­ществ дол­жно быть про­ана­лизи­рова­но за­ранее при стан­дар­тном вве­дении. Во вто­ром слу­чае об­разцы, отоб­ранные че­рез один и тот же про­межу­ток вре­мени пос­ле вве­дения раз­личных ВК, объ­еди­ня­ют­ся в еди­ный пул, ко­торый и ана­лизи­ру­ет­ся. Счи­та­ет­ся, что по­доб­ным ме­тодом мож­но кос­венно оце­нить зна­чение AUC (для рас­че­та от­но­ситель­ной би­одос­тупнос­ти) [14].

Меж­ви­довое мас­шта­биро­вание ос­но­вано на сходс­тве ос­новных фи­зи­оло­гичес­ких и би­охи­мичес­ких про­цес­сов у че­лове­ка и дру­гих мле­копи­та­ющих. Пра­вомер­ным пред­став­ля­ет­ся под­ход к меж­ви­дово­му мас­шта­биро­ванию, ос­но­ван­ный на ал­ло­мет­ри­чес­ких урав­не­ни­ях, нап­ри­мер урав­не­нии для объ­ема рас­пре­деле­ния ln (V) = ln (a) + b·ln (W), где W – вес те­ла, a и b – со­от­ветс­твен­но ко­эф­фи­ци­ент и по­каза­тель сте­пени ал­ло­мет­ри­чес­ко­го урав­не­ния. Зна­чения a и b лег­ко рас­счи­тыва­ют­ся пу­тем рег­ресси­он­но­го ана­лиза [15].

Пе­ренос ФК-дан­ных с че­лове­ка на жи­вот­ных мо­жет слу­жить удов­летво­ритель­ным прог­но­зиру­ющим инс­тру­мен­том, осо­бен­но при оцен­ке кли­рен­са, объ­ема и ха­рак­те­ра рас­пре­деле­ния по ор­га­нам. В то же вре­мя ме­табо­лизм ЛВ у че­лове­ка и жи­вот­ных очень раз­ли­ча­ет­ся. В свя­зи с этим на ран­них ста­ди­ях раз­ра­бот­ки ЛС опы­ты in vivo на жи­вот­ных мо­гут быть ме­нее ин­форма­тив­ны­ми, чем эк­спе­римен­ты in vitro на пре­пара­тах пе­чени че­лове­ка, раз­ли­ча­ющих­ся по сте­пени се­лек­тивнос­ти, с од­ной сто­роны, и ин­тегра­тив­ности – с дру­гой. С этой целью мо­гут быть ис­поль­зо­ваны:

экс­прес­сные фер­мента­тив­ные сис­те­мы;

мик­ро­сомы, S9-фрак­ция;

ге­пато­циты;

сре­зы тка­ней.

Для изу­чения I фа­зы ме­табо­лиз­ма ле­карс­твен­ных средств in vitro на­ибо­лее рас­простра­нен­ная мо­дель – мик­ро­сомы, для об­на­руже­ния конъ­юга­тов (фа­за II ме­табо­лиз­ма), как пра­вило, ис­поль­зу­ют­ся ге­пато­циты.

Про­ница­емость мем­бран эпи­телия для оцен­ки вса­сыва­ния ЛВ оп­ре­деля­ют, ис­поль­зуя клет­ки эпи­тели­аль­ной кар­ци­номы (CACO2) или Madin-Darby-куль­ту­ру кле­ток по­чек со­баки (MDCK) [16].

Ти­пич­ная про­цеду­ра in vitro – оп­ре­деле­ние свя­зыва­ния ЛВ с бел­ка­ми кро­ви. На­ибо­лее рас­простра­нен­ные ме­тоды: уль­тра­филь­тра­ция и рав­но­вес­ный ди­ализ. В ка­чес­тве пер­спек­тивной аль­тер­на­тивы ука­жем так­же хро­матог­ра­фичес­кий под­ход, ос­но­ван­ный на ко­лон­ках, ис­поль­зу­ющих в ка­чес­тве на­пол­ни­теля им­мо­били­зиро­ван­ный сы­воро­точ­ный аль­бу­мин че­лове­ка [17].

В 1-й фа­зе кли­ничес­ких ис­пы­таний при­нима­ют учас­тие здо­ровые доб­ро­воль­цы в ко­личес­тве от 80 до 100 че­ловек (в на­ших ус­ло­ви­ях обыч­но 10-15 мо­лодых здо­ровых муж­чин). Ис­клю­чение сос­тавля­ют ис­пы­тания про­тиво­опу­холе­вых пре­пара­тов и средств борь­бы со СПИ­Дом из-за их вы­сокой ток­сичнос­ти (в дан­ных слу­ча­ях ис­пы­тания сра­зу же про­водят­ся на боль­ных эти­ми за­боле­вани­ями) [18]. Пер­вое при­мене­ние но­вого ЛС на че­лове­ке но­сит ха­рак­тер неп­ред­ска­зу­емос­ти и, сле­дова­тель­но, по­вышен­но­го рис­ка для учас­тни­ков. Вот не­дав­ний при­мер: пос­ледс­твия ис­пы­тания TGN1412, су­пера­гонис­та ан­ти-CD28 мо­нок­ло­наль­но­го ан­ти­тела, у пер­вой ко­гор­ты. В счи­тан­ные ми­нуты пос­ле вве­дения TGN1412 про­изош­ли мно­жес­твен­ные тя­желые по­раже­ния внут­ренних ор­га­нов с уг­ро­зой для жиз­ни ис­пы­ту­емых. Та­кой пла­чев­ный ре­зуль­тат ни­как не со­от­ветс­тво­вал док­ли­ничес­ким дан­ным [19].

В ка­чес­тве ал­го­рит­ма вы­бора стар­то­вой до­зы, как пра­вило, ис­поль­зу­ют кон­цепцию NOAEL(No Observed Adverse Effect Level) у со­от­ветс­тву­юще­го ви­да жи­вот­ных, обыч­но гры­зунов [20]. Глав­ная цель I фа­зы – оп­ре­деле­ние мак­си­маль­ной пе­рено­симой до­зы пу­тем эс­ка­лации доз у ко­горт ис­пы­ту­емых, ины­ми сло­вами бе­зопас­ность.

Изу­чение ФК от­но­сит­ся к важ­ным, но все же вто­рич­ным це­лям фа­зы I. При этом ре­ша­ют­ся сле­ду­ющие за­дачи [21]: оп­ре­деле­ние за­виси­мос­ти кон­цен­тра­ции от до­зы (про­вер­ка ги­поте­зы ли­ней­нос­ти ФК); рас­чет па­рамет­ров ФК и изу­чение их ва­ри­абель­нос­ти меж­ду субъ­ек­та­ми; рас­смот­ре­ние вза­имос­вя­зи до­за – кон­цен­тра­ция – ток­сичность (оп­ре­деле­ние до­зоза­виси­мых эф­фектов); оп­ре­деле­ние до­зы и час­то­ты при­ема ЛС для фа­зы II.

Сле­ду­ет от­ме­тить, что дан­ные ФК, по­лучен­ные на здо­ровых доб­ро­воль­цах фир­мой-раз­ра­бот­чи­ком, в даль­ней­шем прак­ти­чес­ки не под­верга­ют­ся ре­визии и ко­чу­ют по инс­трук­ци­ям эпи­гонов.

Во вто­рой фа­зе про­водят­ся ис­сле­дова­ния эф­фектив­ности пре­пара­та на па­ци­ен­тах, стра­да­ющих кон­крет­ной па­толо­ги­ей. При столь об­ширной вы­бор­ке (300-800 субъ­ек­тов обо­его по­ла) изу­чение ФК про­водит­ся на от­дель­ных груп­пах. На дан­ной ста­дии про­водит­ся изу­чение экс­кре­ции, масс-ба­лан­са ЛВ, оп­ре­деле­ние ме­табо­литов in vivo в мо­че и плаз­ме кро­ви че­лове­ка. При ус­ло­вии бе­зопас­ности внут­ри­вен­но­го вво­да ЛВ оп­ре­деля­ет­ся аб­со­лют­ная би­одос­тупность пре­пара­та. По воз­можнос­ти оп­ре­деля­ют­ся осо­бен­ности про­тека­ния про­цес­сов АР­МЭ у та­ких у­яз­ви­мых суб­по­пуля­ций, как де­ти, ста­рики, ли­ца с пе­ченоч­ной и/или по­чеч­ной па­толо­ги­ей. За ру­бежом изу­чение вли­яния раз­личных фак­то­ров про­водит­ся в фа­зе III кли­ничес­ких ис­сле­дова­ний и в пос­тмар­ке­тин­го­вых ис­сле­дова­ни­ях ме­тода­ми по­пуля­ци­он­ной ки­нети­ки.

Ис­ходным мас­си­вом дан­ных для рас­че­та па­рамет­ров ФК слу­жат зна­чения кон­цен­тра­ции ле­карс­твен­но­го ве­щес­тва в кро­ви, плаз­ме/сы­ворот­ке или иной тест-тка­ни в дис­крет­ные пе­ри­оды вре­мени. Для этой це­ли при­меня­ют­ся раз­но­об­разные ана­лити­чес­кие ме­тоды. Сре­ди них сле­ду­ет упо­мянуть мик­ро­би­оло­гичес­кие ме­тоды, по­лярог­ра­фию, ка­пил­лярный элек­тро­форез. Все же на­ибо­лее рас­простра­нен­ны­ми ме­тода­ми яв­ля­ют­ся вы­соко­эф­фектив­ная жид­кос­тная и га­зовая хро­матог­ра­фия и им­му­нофер­мен­тный ана­лиз (ИФА), в час­тнос­ти enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) [22]. Пос­ледний по­лучил свое раз­ви­тие в ви­де флу­орес­цен­тно­го по­ляри­заци­он­но­го им­му­но­ана­лиза [23], ко­торый ос­но­ван на воз­раста­нии по­ляри­зации флу­орес­ценции не­боль­ших флу­орес­це­ин-ме­ченых мо­лекул ан­ти­гена (трей­се­ров) при их вза­имо­дей­ствии со спе­цифи­чес­ки­ми ан­ти­тела­ми.

На­ходят свое при­мене­ние так­же и та­кие ана­лити­чес­кие плат­формы, как га­зовая хро­матог­ра­фия – масс-спек­тро­мет­рия, вы­соко­эф­фектив­ная жид­кос­тная хро­матог­ра­фия (ВЭЖХ) с ди­од­но­мат­ричной де­тек­ци­ей и ЯМР-спек­трос­ко­пия. Ши­рокое рас­простра­нение в ле­карс­твен­ном ана­лизе по­лучил ме­тод ВЭЖХ в со­чета­нии с тан­демной масс-спек­тро­мет­ри­ей (ЖХ-МС-МС), поз­во­ля­ющий пу­тем се­лек­тивной ре­ак­ции мо­нито­рин­га до­бивать­ся ис­клю­читель­ной чувс­тви­тель­нос­ти и се­лек­тивнос­ти ко­личес­твен­но­го оп­ре­деле­ния мик­ро­коли­честв ЛВ [24, 25].

ИФА и ЖХ-МС-МС име­ют свои дос­то­инс­тва, глав­ны­ми из ко­торых яв­ля­ют­ся воз­можность ав­то­мати­зации в про­цес­се ИФА и быс­трый пе­реход с од­но­го ви­да ана­лиза на дру­гой при ЖХ-МС-МС. К чис­лу не­дос­татков сле­ду­ет от­нести пе­рек­рес­тную кон­та­мина­цию (ИФА), и­он­ную суп­рессию и мат­ричный эф­фект (ЖХ-МС-МС).

ЗАК­ЛЮ­ЧЕНИЕ

Сле­ду­ет от­ме­тить, что изу­чение ФК име­ет по край­ней ме­ре две сос­тавля­ющих. Преж­де все­го оно обус­ловле­но тре­бова­ни­ями кон­тро­лиру­ющих ор­га­низа­ций: досье, не со­дер­жа­щее ФК-ин­форма­ции, поп­росту не бу­дет рас­смат­ри­вать­ся. С дру­гой сто­роны, как сле­ду­ет из вы­ше­из­ло­жен­но­го, ФК-дан­ные об­ла­да­ют на­уч­но-прак­ти­чес­кой зна­чимостью и спо­собс­тву­ют ка­чес­твен­ной раз­ра­бот­ке ЛС.

Источник: pharmjournal.ru