Валидация тест-системы для количественного определения концентрации трастузумаба (Герцептин, Гертикад) в биологических жидкостях методом твердофазного иммуноферментного анализа

Актуальность. Трастузумаб является препаратом выбора для терапии HER2+ рака молочных желез. Для определения фармакодинамики препарата при персонализированной терапии необходима валидированная биоаналитическая методика определения концентрации препарата в биологических жидкостях. Цель работы: создание и оценка пригодности (валидация) тест-системы на основе твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) для количественного определения концентрации трастузумаба в сыворотке/плазме крови человека. Материалы и методы. Представленная тест-система является классическим ИФА набором с 96-луночным полистероловым планшетом, лунки которого покрыты специфическими к трастузумабу моноклональными антителами, вторичными козьими антителами к Fc фрагменту, конъюгированными с пероксидазой хрена, субстратного раствора — (3,5,3',5')-тетраметилбензидина (ТМБ) и стоп-раствора. Растворы для контроля качества готовились путём разведения известных концентраций трастузумаба в бланковой сыворотке. Результаты. В ходе работы установлены предел обнаружения (0,84 нг/мл) и нижний предел количественного определения (1,41 нг/мл) трастузумаба в сыворотке/плазме крови, доказана высокая селективность определения аналита в многокомпонентной матрице. Найденные средние значения концентраций трастузумаба не отклонялись от номинальных значений на более чем 11,42 % во всём диапазоне определяемых концентраций, внутри- и межсерийная прецизионность тест-системы не превышала 11,31 %, общая ошибка метода — 20,0 %. Продемонстрированные характеристики позволяют применять данную тест-систему для анализа широкого диапазона концентраций трастузумаба в биологических образцах. Стабильность компонентов тест-системы определена как не меньше 1 года при соблюдении условий хранении. Заключение. Представленная тест-система соответствует международным валидационным требованиям и пригодна для практического применения.

1. Mendes D, Alves C, Afonso N, Cardoso F, Passos-Coelho JL, Costa L, Andrade S, Batel-Marques F. The benefit of HER2-targeted therapies on overall survival of patients with metastatic HER2-positive breast cancer–a systematic review. Breast Cancer Res. 2015;17:140. DOI: 10.1186/s13058-015-0648-2.

2. Viani GA, Afonso SL, Stefano EJ, De Fendi LI, Soares FV. Adjuvant trastuzumab in the treatment of her-2-positive early breast cancer: A metaanalysis of published randomized trials. BMC Cancer. 2007;7:153. DOI: 10.1186/1471-2407-7-153.

3. Swain SM, Miles D, Kim S-B, et al. Pertuzumab, trastuzumab, and docetaxel for HER2-positive metastatic breast cancer (CLEOPATRA): End-of-study results from a double-blind, randomised, placebo-controlled, phase 3 study. Lancet Oncol. 2020;21:519–530. DOI: 10.1016/S1470-2045(19)30863-0.

4. Eiger D, Agostinetto E, Saúde-Conde R, de Azambuja E. The Exciting New Field of HER2-Low Breast Cancer Treatment. Cancers (Basel). 2021 Mar 1;13(5):1015. DOI: 10.3390/cancers13051015.

5. Bailey TA, Luan H, Clubb RJ, et al. Mechanisms of Trastuzumab resistance in ErbB2-driven breast cancer and newer opportunities to overcome therapy resistance. J Carcinog. 2011;10:28. DOI: 10.4103/1477-3163.90442.

6. Maple L, Lathrop R, Bozich S, Harman W, Tacey R, Kelley M, Danilkovitch-Miagkova A. Development and validation of ELISA for herceptin detection in human serum. J Immunol Methods. 2004;295(1-2): 169–82. DOI: 10.1016/j.jim.2004.09.012.

7. Писарев ВВ, Уляшова ММ, Гильдеева ГН. Валидация иммуноферментной тест-системы для доклинических исследований фармакокинетики ритуксимаба. Ведомости Научного центра экспертизы средств медицинского применения. 2019;9(2):131–139. [Pisarev VV, Ulyashova MM, Gildeeva GN. Validation of enzyme immunoassay for preclinical pharmacokinetic trials of rituximab. Vedomosti Nauchnogo tsentra ekspertizy sredstv meditsinskogo primeneniya = The Bulletin of the Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products. 2019;9(2):131–139. (In Russ).]. DOI: 10.30895/1991-2919-2019-9-2-131-139.

8. Allinson JL. Clinical biomarker validation. Bioanalysis. 2018 Jun 1;10(12):957–968. DOI: 10.4155/bio-2018-0061.

9. CPMP/ICH/3812/95. Note for guidance on validation of analytical procedures: text and methodology. London: June 1995.

10. Руководство по валидации методик анализа лекарственных средств / под ред. Н. В. Юргеля, А. Л. Младенцева, А. В. Бурдейна, М. А. Гетьмана, А. А. Малина. М.: Ассоциация российских фармацевтических производителей, 2007.

11. Митькина Л.И., Ковалева Е.Л. Подходы к оценке пригодности аналитических методик при проведении экспертизы качества лекарственных средств. Ведомости Научного центра экспертизы средств медицинского применения. 2012;(2):6–9.

12. Tsurusawa N, Chang J, Namba M, et al. Modified ELISA for Ultrasensitive Diagnosis. J Clin Med. 2021;10(21):5197. DOI: 10.3390/jcm10215197.

13. Crowther JR. The ELISA guidebook. Methods Mol Biol. 2000;149: III-IV, 1-413. DOI: 10.1385/1592590497.

14. Guidance for Industry Immunogenicity Assessment for Therapeutic Protein Products. 2014. Available from: http://www.fda.gov/downloads/Drugs/GuidanceComplianceRegulatoryInformation/Guidances/UCM338856.pdf.

15. Shankar G, Devanarayan V, Amaravadi L, et al. Recommendations for the validation of immunoassays used for detection of host antibodies against biotechnology products. J Pharm Biomed Anal. 2008 Dec 15;48(5):1267–1281. DOI: 10.1016/j.jpba.2008.09.020.