Нестероидные противовоспалительные средства (НПВС) — эффективные средства для терапии боли и воспаления, показаны к применению при широком круге патологических состояний, среди которых остеоартрит, ревматоидный артрит, спондилоартрит, подагра и другие метаболические артропатии. Для НПВС характерны дозозависимые класс-специфические побочные эффекты, обусловленные механизмом действия препаратов этой фармакотерапевтической группы — ингибированием 1 и 2 изоформы циклооксигеназы (ЦОГ-1 и ЦОГ-2), к которым относятся гастроинтестинальные, кардиоваскулярные и нефротоксические нежелательные явления (НЯ), ограничивающие назначение этих препаратов [1].

При воспалении происходит ферментативная и неферментативная деструкция мембранных фосфолипидов, липопротеидов, гликолипидов с высвобождением из них высших жирных кислот, арахидоновой в частности, и свободных липидов. Вследствие повышения образования арахидоновой кислоты значительно увеличивается образование простагландинов (под действием ЦОГ) и лейкотриенов (под действием 5-липооксигеназы). При воспалении интенсифицируется свободнорадикальное перекисное окисление липидов (ПОЛ), продукты которого повышают проницаемость мембран, что приводит к цитолизу и нарушению регуляции тканевых процессов [2]. Способность НПВС вызывать митохондриальную дисфункцию с избыточным образованием активных форм кислорода рассматривается в качестве механизма повреждающего действия НПВС на желудочно-кишечный тракт и сердечно-сосудистую систему [3, 4]. Поэтому одним из подходов к повышению эффективности и безопасности применения НПВС может рассматриваться их использование в комбинации с антиоксидантными и мембранопротекторными средствами.

Ранее нами было показано, что обладающий антиоксидантным и мембраностабилизирующим действием этилметилгидроксипиридина сукцинат (ЭМГПС) [5] усиливает эффекты диклофенака натрия и эторикоксиба: антиэкссудативный — на модели каррагинанового отёка у мышей и крыс [6–8], противоболевой — на моделях острой висцеральной боли у мышей, острой соматической боли, вызванной формалином и каррагинаном, и послеоперационной боли у крыс [7, 9, 10]. Наряду с повышением противовоспалительной и противоболевой эффективности при применении НПВС совместно с ЭМГПС повышается и безопасность НПВС. Так, ЭМГПС при введении с эторикоксибом предупреждает вызываемое эторикоксибом повышение артериального давления [11] и при введении с диклофенаком натрия или эторикоксибом ослабляет выраженность ульцерогенного действия НПВС на модели гастротоксичности у крыс [12].

Целью настоящего исследования явилось изучение действия ЭМГПС, неселективного ингибитора ЦОГ диклофенака натрия, селективного ингибитора ЦОГ-2 эторикоксиба и комбинаций этих НПВС с ЭМГПС при курсовом пероральном введении на модели коллаген-индуцированного артрита (КИА) у мышей BALB/c.

Животные. Исследование выполнено на половозрелых самцах мышей линии BALB/c массой 21–26 г (n = 53) из питомника лабораторных животных филиала «Столбовая» ФГБУН «Научный центр биомедицинских технологий ФМБА» (Московская область). Животных содержали в соответствии со стандартными условиями вивария при свободном доступе к корму и воде при 12-часовом световом режиме. Организацию и проведение работ осуществляли в соответствии с ГОСТ 33216-2014 «Руководство по содержанию и уходу за лабораторными животными. Правила содержания и ухода за лабораторными грызунами и кроликами», ГОСТ 33215-2014 «Руководство по содержанию и уходу за лабораторными животными. Правила оборудования помещений и организации процедур». Проведение эксперимента одобрено Комиссией по биомедицинской этике ФГБНУ «ФИЦ оригинальных и перспективных биомедицинских и фармацевтических технологий» (Протокол № 01 от 18 января 2023 г.).

Коллаген-индуцированный артрит (КИА) является наиболее изученной моделью РА [13]. У животных с этой моделью развивается аутоиммунный процесс с экссудативным воспалением на начальных этапах его формирования, выраженность которого снижают НПВС. Эффективность ЭМГПС, диклофенака натрия, эторикоксиба и комбинаций этих НПВС с ЭМГПС на модели КИА у мышей BALB/c оценивали по способности этих средств снижать выраженность симптомов патологического процесса: тяжесть КИА, отёк задних лап, гипералгезию и локомоторные нарушения. В сыворотке крови животных с КИА регистрировали концентрацию продукта гидролиза коллагена — оксипролина и активность ферментов антиоксидантной защиты каталазы и глутатионпероксидазы.

КИА моделировали у мышей BALB/c по [14]. Иммунизацию проводили дважды, первую осуществляли введением мышам внутрикожно в основание хвоста 100 мкг бычьего коллагена II типа, эмульгированного с полным адъювантом Фрейнда (ПАФ) в объёме 50 мкл. Перед повторной иммунизацией животных с внутрикожно введенным бычьим коллагеном II типа с ПАФ рандомизировали на группы по наличию симптома развивающейся отёчности лап и массе тела. Вторую иммунизацию осуществляли на 21-е сутки после первой таким же способом.

Животных рандомизировали на следующие группы:

Основанием для выбора доз НПВС и ЭМГПС при применении в комбинации явились результаты ранее проведённых экспериментов [8].

Оценку выраженности артрита проводили визуально для каждой лапы животного отдельно, подсчитывали сумму баллов для каждой мыши [15]: 0 — отсутствие видимых изменений; 0,5 — покраснение и отёк одного сустава пальца; 1 — покраснение и лёгкий отёк подушечки стопы, скакательных суставов или 2–5 пальцев; 2 — покраснение и отёк 2 суставов; 3 — покраснение и отёк лапы полностью; 4 — сниженная отёчность и деформации суставов. То есть, максимальная выраженность проявлений артрита у животного соответствовала 16 баллам.

У мышей BALB/c с КИА оценивали отёк задних лап по увеличению их диаметра в области плюсны (мм), который измеряли с помощью электронного штангенциркуля на 21-е сутки после первой иммунизации (перед второй иммунизацией бычьим коллагеном II типа) и на 7-, 14- и 21-е сутки после второй иммунизации бычьим коллагеном II типа.

На 7-, 14- и 21-е сутки после второй иммунизации бычьим коллагеном II типа у мышей BALB/c оценивали механическую гипералгезию с помощью филаментов фон Фрея массой от 0,06 до 23,96 г (Aesthesio® Ugo Basile, Италия). Мышей помещали по отдельности в пластиковые камеры (20×10×14 см) на возвышенной решетчатой платформе с перфорациями и в течение 15 мин адаптировали в условиях покоя. Филаменты фон Фрея предъявляли перпендикулярно в разных местах подошвенной поверхности задних лап животных, исключая области пальцев и скакательного сустава (длительность воздействия составляла 2 с). Для каждого филамента фон Фрея тестирование проводили 5 раз с интервалом 3 с. Определяли минимальный порог реакции, вызывающий одергивание лапы [16].

У мышей BALB/c с КИА регистрировали наличие моторного дефицита, оценивая координацию движений в тесте «Вращающийся стержень» (Rota Rod, Ugo Basile, Италия) [17]. Животных адаптировали к условиям методики перед повторной иммунизацией бычьим коллагеном II типа, осуществляя 3 посадки на барабан установки со скоростью вращения 5 оборотов/мин. Тестирование моторного навыка проводили при режиме вращения барабана установки с постоянной скоростью 10 оборотов/мин, регистрируя латентный период (ЛП) падения мышей (с) на 7- и 14-е сутки после второй иммунизации мышей.

На 42-е сутки после первой инъекции бычьего коллагена II типа мыши BALB/c были подвергнуты эвтаназии (декапитация), была получена сыворотка крови для проведения биохимического исследования.

Концентрацию оксипролина определяли колориметрическим методом [18]. Активность каталазы оценивали по методу [19], глутатионпероксидазы — по [20].

Статистический анализ проводили с использованием программного обеспечения GraphPad Prism 8 для Windows. Тестирование выборок на нормальность распределения проводили с помощью критерия Шапиро–Уилка. Поскольку распределение показателей в группах отличалось от нормального, для сравнения независимых выборок использовали непараметрический критерий Краскела–Уоллиса с последующим применением критерия Манна–Уитни без/с поправкой Беньямини–Хохберга. Результаты в таблицах представлены в виде медианы, 1 и 3 квартилей. Различия между группами считали статистически значимыми при p ≤ 0,05.

На 3-и сутки после второй инъекции бычьего коллагена II типа в группе мышей «КИА» зарегистрированы проявления воспаления: за исключением одного животного, у остальных были как минимум покраснение и отёк 2 суставов на одной из задних лап. Отёчность конечностей животных в группе «КИА» продолжала нарастать до 14 суток после второй инъекции бычьего коллагена II типа. Тяжесть артрита в этой группе на 14-е сутки после второй инъекции бычьего коллагена II типа соответствовала медиане, равной 10 баллам, и сохранялась на этом уровне до 17 суток, после чего отёк лап уменьшался, и усиливалась деформация суставов (табл. 1). На 21-е сутки после второй инъекции бычьего коллагена II типа (42 сутки опыта) в группе «КИА» у 5 животных зарегистрирована выраженная деформация суставов задних лап.

Введение мышам BALB/c эторикоксиба в дозе 1 мг/кг или ЭМГПС в дозе 25 мг/кг в течение 3 суток после второй инъекции бычьего коллагена II типа задерживало манифестацию симптомов артрита, о чём свидетельствовало снижение их выраженности (до 0 баллов). При последующей регистрации симптомов артрита у мышей BALB/c, которым вводили эторикоксиб или ЭМГПС, их уменьшения по сравнению с группой «КИА» зафиксировано не было. Оценка тяжести артрита не выявила её снижения у животных, которым вводили диклофенак натрия в дозе 1 мг/кг, на протяжении всего периода регистрации, а при применении комбинации диклофенака натрия в дозе 1 мг/кг и ЭМГПС в дозе 25 мг/кг у мышей BALB/c было зафиксировано снижение тяжести симптомов артрита на 3-и сутки после второй инъекции бычьего коллагена II типа. Эффективность комбинации эторикоксиба и ЭМГПС была более выраженной: эта комбинация значимо снижала тяжесть КИА у мышей BALB/c с 3 по 17 сутки после 2 инъекции бычьего коллагена II типа (табл. 1).

Таблица 1. Влияние этилметилгидроксипиридина сукцината, диклофенака натрия, эторикоксиба и комбинаций НПВС с ЭМГПС на тяжесть коллаген-индуцированного артрита у мышей BALB/c (медиана (Q1; Q3))

ГруппаСутки после 2-ой инъекции бычьего коллагена II типа 3 сутки7 сутки14 сутки17 сутки21 суткиКИА2,5 (1,5; 3,0)8,5 (6,5; 9,0)10,0 (8,0; 11,0)10,0 (10,0; 12,0)8,0 (6,0; 10,0)КИА + ЭМГПС 25 мг/кг0 (0; 0)*9,0 (7,5; 12,0)12,0 (9,0; 14,0)12,0 (9,0; 14,0)10,0 (7,0; 12,0)Диклофенак 1 мг/кг2,5 (2,0; 4,0)8,0 (8,0; 9,0)10,0 (9,0; 11,0)10,0 (10,0; 12,0)9,0 (8,0; 10,0)Эторикоксиб 1 мг/кг0 (0; 1,0)*8,5 (5,5; 9,5)10,0 (7,0; 12,0)10,0 (9,0; 12,0)9,0 (8,0; 10,0)Диклофенак 1 мг/кг + ЭМГПС 25 мг/кг0 (0; 1,5)*7,0 (4,0; 8,0)10,0 (8,0; 11,0)10,0 (8,0; 11,0)8,0 (5,0; 9,0)Эторикоксиб 1 мг/кг + ЭМГПС 25 мг/кг0 (0; 0)*3,0 (2,0; 5,0)*#6,0 (4,0; 8,0)*#6,0 (4,0; 8,0)*#7,0 (5,0; 8,0)

Примечания: * – p ≤ 0,05 по сравнению с группой «КИА»; # – p ≤ 0,05 по сравнению с группой «КИА + ЭМГПС 25 мг/кг», критерий Манна–Уитни с поправкой Беньямини–Хохберга; КИА — коллаген-индуцированный артрит; ЭМГПС — этилметилгидроксипиридина сукцинат.

Через 7 суток после второй инъекции бычьего коллагена II типа в группе мышей «КИА» зарегистрировано значимое увеличение диаметра задних лап в области плюсны: отёк левой лапы соответствовал увеличению медианы её диаметра на 22,7 %, правой — на 28,6 % по сравнению с соответствующими значениями в контрольной группе. С 14 суток после второй инъекции бычьего коллагена II типа отёк задних лап уменьшался. На 14-е сутки после второй инъекции бычьего коллагена II типа зарегистрировано только значимое увеличение медианы диаметра левой плюсны — на 14,3 %. На 21-е сутки после второй инъекции бычьего коллагена II типа значимых различий диаметров задних лап между группами мышей «КИА» и «Контроль» выявлено не было (табл. 2).

На 7-е сутки введения препаратов диклофенак натрия, эторикоксиб и их комбинации с ЭМГПС значимо снижали выраженность экссудативного воспаления правой лапы животных с КИА на 11,1–18,5 %. Значимого влияния на диаметр плюсны задних лап животных на 14 и 21 сутки после второй инъекции бычьего коллагена II типа изучаемые средства не оказывали (см. табл. 2).

Таблица 2. Влияние этилметилгидроксипиридина сукцината, диклофенака натрия, эторикоксиба и комбинаций НПВС с этилметилгидроксипиридина сукцинатом на отёк плюсны мышей BALB/c с коллаген-индуцированным артритом (медиана (Q1; Q3))

ГруппаДиаметр задних конечностей, мм 7 сутки14 сутки21 сутки левая лапаправая лапалевая лапаправая лапалевая лапаправая лапаКонтроль2,2 (2,1; 2,3)*2,1 (1,9; 2,3)*2,0 (2,0; 2,1)*2,0 (1,9; 2,2)2,2 (2,1; 2,4)2,1 (2,1; 2,2)КИА2,7 (2,5; 2,8)2,7 (2,5; 2,8)2,4 (2,2; 2,5)2,2 (2,1; 2,4)2,4 (2,2; 2,6)2,2 (2,2; 2,3)КИА + ЭМГПС 25 мг/кг2,4 (2,2; 2,5)2,2 (2,1; 2,7)2,4 (2,2; 2,5)2,3 (2,1; 2,4)2,4 (2,3; 2,7)2,2 (2,0; 2,2)Диклофенак 1 мг/кг2,3 (2,2; 2,4)2,2 (1,9; 2,4)*2,4 (2,2; 2,6)2,3 (2,1; 2,4)2,3 (2,1; 2,4)2.2 (2,0; 2,3)Эторикоксиб 1 мг/кг2,3 (2,1; 2,5)2,4 (2,3; 2,5)*2,3 (2,2; 2,5)2,4 (2,3; 2,6)2,4 (2,2; 2,5)2,3 (2,1; 2,4)Диклофенак 1 мг/кг + ЭМГПС 25 мг/кг2,3 (2,1; 2,6)2,2 (2,0; 2,4)*2,4 (2,2; 2,7)2,4 (2,2; 2,5)2,4 (2,2; 2,6)2,3 (2,1; 2,4)Эторикоксиб 1 мг/кг + ЭМГПС 25 мг/кг2,3 (2,2; 2,5)2,2 (2,1; 2,5)*2,4 (2,1; 2,5)2,3 (2,2; 2,4)2,3 (2,2; 2,4)2.2 (2,2; 2,3)

Примечания: * – p ≤ 0,05 по сравнению с группой «КИА», критерий Манна–Уитни с поправкой Беньямини–Хохберга; КИА — коллаген-индуцированный артрит; ЭМГПС — этилметилгидроксипиридина сукцинат.

У мышей BALB/c с КИА на протяжении всего периода наблюдения (21 сутки после второй инъекции бычьего коллагена II типа) фиксировали гипералгезию при стимуляции подошвенной поверхности лап животных филаментами фон Фрея, и её выраженность в этот период не снижалась. Диклофенак натрия, эторикоксиб и ЭМГПС не оказывали значимого влияния на болевую чувствительность животных. Однако применение диклофенака натрия и эторикоксиба в дозе 1 мг/кг совместно с ЭМГПС в дозе 25 мг/кг приводило к значимому повышению порога болевой чувствительности мышей на 7-е сутки его регистрации по сравнению с группой мышей с КИА, которым не вводили изучаемые средства. Наиболее выраженный противоболевой эффект зарегистрирован при введении комбинации диклофенака натрия и ЭМГПС. Эта комбинация значимо повышала порог болевой чувствительности животных по сравнению с болевым порогом в группах мышей, которым вводили только ЭМГПС или только диклофенак натрия. На 14- и 21-е сутки регистрации гипералгезии комбинации диклофенака натрия и эторикоксиба с ЭМГПС значимого влияния на болевую чувствительность животных в тесте фон Фрея не оказывали (табл. 3).

Таблица 3. Влияние этилметилгидроксипиридина сукцината, диклофенака натрия, эторикоксиба и комбинаций НПВС с этилметилгидроксипиридина сукцинатом на порог болевой реакции мышей BALB/c с коллаген-индуцированным артритом в тесте фон Фрея (медиана (Q1; Q3))

ГруппаПорог болевой чувствительности, г 7 сутки14 сутки21 сутки левая лапаправая лапалевая лапаправая лапалевая лапаправая лапаКонтроль2,0 (2,0; 6,0)2,0 (2,0; 6,0)4,0 (1,4; 4,0)4,0 (1,4; 4,0)3,0 (1,0; 5,0)3,0 (1,0; 5,0)КИА0,4 (0,2; 1,0)*0,4 (0,2; 1,0)*0,4 (0,2; 0,6)*0,4 (0,2; 0,6)*0,2 (0,2; 0,4)*0,2 (0,2; 1,0)*КИА + ЭМГПС 25 мг/кг0,4 (0,2; 1,0)*&0,4 (0,2; 1,0)*&1,0 (0,2; 1,0)*0,4 (0,2; 1,0)*0,4 (0,4; 1,0)*0,4 (0,4; 1,1)*Диклофенак 1 мг/кг0,4 (0,2; 1,0)*&0,4 (0,2; 1,4)*&0,4 (0,2; 0,6)*0,4 (0,1; 0,4)*0,2 (0,1; 1,0)*0,2 (0,1; 1,0)*Эторикоксиб 1 мг/кг0,6 (0,2; 1,0)*0,4 (0,2; 1,0)*1,0 (0,6; 1,0)*1,0 (0,4; 1,4)*0,6 (0,1; 1,4)*0,6 (0,1; 1,1)*Диклофенак 1 мг/кг + ЭМГПС 25 мг/кг3,0 (1,2; 6,0)#3,0 (1,2; 6,0)#0,8 (0,4; 3,0)*0,8 (0,5; 1,7)*1,0 (0,4; 1,4)1,0 (0,5; 1,4)Эторикоксиб 1 мг/кг + ЭМГПС 25 мг/кг1,0 (1,0; 1,0)*1,0 (1,0; 1,0)#0,2 (0,2; 0,4)*0,4 (0,2; 0,4)*0,2 (0,2; 0,4)*0,2 (0,2; 0,4)*

Примечания: * – p < 0,05 по сравнению с группой «Контроль»; # – p ≤ 0,04 по сравнению с группой «КИА», критерий Манна–Уитни с поправкой Беньямини–Хохберга; & – p ≤ 0,04 по сравнению с группой «Диклофенак 1 мг/кг + ЭМГПС 25 мг/кг», критерий Манна–Уитни с поправкой Беньямини–Хохберга; КИА — коллаген-индуцированный артрит; ЭМГПС — этилметилгидроксипиридина сукцинат.

На 7-е сутки после второй инъекции бычьего коллагена II типа у животных группы «КИА» зарегистрирован моторный дефицит, о чём свидетельствовало уменьшение ЛП падения мышей этой группы с барабана установки «Вращающийся стержень» в 3 раза по сравнению с контрольной группой. В группах мышей с КИА, которым вводили НПВС в дозе 1 мг/кг, ЭМГПС в дозе 25 мг/кг и их комбинации, ЛП падения животных с барабана установки значимо не отличался от этого параметра в группе мышей без патологии. Значимое увеличение этого параметра по сравнению с группой «КИА» зарегистрировано при введении комбинации эторикоксиба и ЭМГПС, которая восстанавливала координацию движений мышей с КИА практически до уровня контрольных животных. Через 14 суток после второй инъекции бычьего коллагена II типа у мышей группы «КИА» координация движений восстанавливалась до показателя контрольных мышей, и ЭМГПС, комбинации ЭМГПС с НПВС не влияли на координацию движений животных. В отличие от них, диклофенак натрия и эторикоксиб снижали координацию движений, что проявлялось в значимом уменьшении ЛП падения животных с барабана установки соответственно в 2,3 и 2,7 раза по сравнению с контрольной группой/группой «КИА» (табл. 4).

Таблица 4. Влияние этилметилгидроксипиридина сукцината, диклофенака натрия, эторикоксиба и комбинаций НПВС с этилметилгидроксипиридина сукцинатом на латентный период падения мышей BALB/c с коллаген-индуцированным артритом с установки «Вращающийся стержень» (медиана (Q1; Q3))

ГруппаЛатентный период, с 7 сутки14 суткиКонтроль180,0 (117,0; 180,0)180,0 (180,0; 180,0)КИА60,0 (53,0; 129,0)*180,0 (34,0; 180,0)КИА + ЭМГПС 25 мг/кг180,0 (70,0; 180,0)180,0 (49,0; 180,0)Диклофенак 1 мг/кг67,0 (37,0; 180,0)77,0 (51,0; 180,0)*Эторикоксиб 1 мг/кг127,0 (47,0; 180,0)66,0 (25,0; 180,0)*Диклофенак 1 мг/кг + ЭМГПС 25 мг/кг81,0 (41,0; 180,0)180,0 (180,0; 180,0)Эторикоксиб 1 мг/кг + ЭМГПС 25 мг/кг177,0 (134,0; 180,0)#180,0 (180,0; 180,0)

Примечания: * — p < 0,05 по сравнению с группой «Контроль»; # — p < 0,05 по сравнению с группой «Коллагеновый артрит», критерий Манна–Уитни; КИА — коллаген-индуцированный артрит; ЭМГПС — этилметилгидроксипиридина сукцинат.

На 42-е сутки развития патологического процесса в сыворотке крови мышей BALB/c с КИА была повышена концентрация маркера распада коллагена оксипролина на 21,1 %. ЭМГПС снижал повышенную при КИА концентрацию оксипролина на 25,7 %, а эторикоксиб, напротив, повышал её ещё на 54,0 %. Применение эторикоксиба совместно с ЭМГПС предупреждало этот эффект селективного ингибитора ЦОГ-2. Концентрация оксипролина в группах мышей BALB/c с КИА была ниже при введении им диклофенака per se или совместно с ЭМГПС (табл. 5).

На 42-е сутки развития патологического процесса в сыворотке крови мышей BALB/c с КИА зарегистрировано снижение активности каталазы в 1,9 раза по сравнению с группой контрольных животных, активность другого антиоксидантного фермента глутатионпероксидазы, напротив, повышалась в 2,1 раза. Курсовое введение мышам BALB/c с КИА ЭМГПС, диклофенака, эторикоксиба и комбинаций НПВС с ЭМГПС предупреждало снижение активности каталазы в сыворотке крови. Активность глутатионпероксидазы в группах мышей с КИА, которым вводили препараты, значимо не отличалась от активности фермента в группе животных без патологии (табл. 5).

Таблица 5. Влияние этилметилгидроксипиридина сукцината, диклофенака натрия, эторикоксиба и комбинаций НПВС с этилметилгидроксипиридина сукцинатом на концентрацию оксипролина, активность каталазы и глутатионпероксидазы в сыворотке крови мышей BALB/c с коллаген-индуцированным артритом (медиана (Q1; Q3))

ГруппаКонцентрация оксипролина, мкг/млАктивность ферментов, ммоль/(минмлсм)  КаталазыГлутатионпероксидазыКонтроль3,29 (2,90; 3,40)0,0548 (0,0541; 0,0597)0,8514 (0,5119; 1,2017)КИА4,17 (4,17; 4,40)*0,0296 (0,0178; 0,0411)*0,4132 (0,3601; 0,7424)*КИА + ЭМГПС 25 мг/кг3,10 (2,82; 3,30)#0,0550 (0,0492; 0,0603)#0,6848 (0,5964; 0,8300)Диклофенак 1 мг/кг2,45 (2,20; 4,10)0,0576 (0,0541; 0,0657)#0,3860 (0,0359; 0,6504)Эторикоксиб 1 мг/кг6,42 (4,49; 7,53)*#0,0500 (0,0465; 0,0600)#0,5513 (0,3806; 0,9095)Диклофенак 1 мг/кг + ЭМГПС 25 мг/кг3,44 (2,70; 3,92)##0,0574 (0,0491; 0,0603)#0,5441 (0,4396; 1,0811)Эторикоксиб 1 мг/кг + ЭМГПС 25 мг/кг4,95 (3,67; 5,54)0,0518 (0,0449; 0,0571)#0,5347 (0,0786; 0,6120)

Примечания:  — p < 0,05 по сравнению с группой «Контроль»; # — p < 0,05 по сравнению с группой «КИА», критерий Манна–Уитни с поправкой Беньямини–Хохберга; ## — p < 0,05 по сравнению с группой «КИА», критерий Манна–Уитни; КИА — коллаген-индуцированный артрит; ЭМГПС — этилметилгидроксипиридина сукцинат.

Результаты проведённого эксперимента свидетельствуют о том, что двукратная внутрикожная инъекция бычьего коллагена II типа, эмульгированного с ПАФ, в основание хвоста мышей BALB/c вызвала развитие хронического воспалительного процесса. С 3 по 17 сутки после разрешающей инъекции регистрировали экссудативное воспаление, проявлявшееся отёчностью задних лап животных (максимум отёчности зафиксирован на 4–17 сутки), после чего отёчность лап уменьшалась и более выраженным был процесс деформации и деструкции суставов, при котором в сыворотке крови мышей с КИА повышается уровень оксипролина [21]. Наряду с повышением уровня оксипролина в сыворотке крови мышей BALB/c с КИА на 42-е сутки развития патологического процесса зарегистрирован функциональный дисбаланс антиоксидантных ферментов каталазы и глутатионпероксидазы. Активность каталазы, фермента первой линии антиоксидантной защиты, предотвращающего накопление в клетке перекиси водорода за счёт её окисления до воды и молекулярного кислорода [22], была значительно снижена, а активность другого фермента антиоксидантной защиты глутатионпероксидазы компенсаторно повышалась. Глутатионпероксидаза «обезвреживает» гидроперекиси и предупреждает образование гидроперекисей жирных кислот за счёт окисления перекиси водорода до воды и молекулярного кислорода [23]. Зарегистрированное компенсаторное повышение активности глутатионпероксидазы при сниженной активности каталазы у мышей BALB/c с КИА свидетельствует о развивающемся параллельно с патологическим защитном процессе, направленном на устранение последствий интенсификации свободнорадикального ПОЛ. Известно, что окислительный стресс приводит к повреждению хондроцитов [24], поэтому повышение уровня оксипролина в сыворотке крови мышей BALB/c с КИА может быть следствием цитотоксического действия продуктов ПОЛ, уровень которых повышается при воспалительных процессах.

Диклофенак натрия и эторикоксиб вводили ежедневно в течение 21 суток перорально в малой дозе 1 мг/кг, так как ежедневное курсовое введение этих НПВС в больших дозах 5 и 10 мг/кг, в которых они обладают антиэкссудативным и противоболевым действием [7–10], приводит к развитию выраженных побочных эффектов, проявляющихся снижением массы тела и ухудшением состояния животных вплоть до их гибели (в случае введения диклофенака натрия) [6, 11]. Эторикоксиб в дозе 1 мг/кг при введении с 21 по 24 сутки после первой инъекции коллагена замедляет развитие симптомов артрита у мышей BALB/c, эторикоксиб и диклофенак натрия в дозе 1 мг/кг снижают выраженность отёка задних лап на 7-е сутки после разрешающей инъекции бычьего коллагена II типа.

ЭМГПС в дозе 25 мг/кг замедляет развитие симптомов артрита у мышей BALB/c при введении с 21 по 24 сутки после первой инъекции коллагена и усиливает действие НПВС, что проявляется в увеличении периода снижения тяжести артрита в группах животных, которым вводили комбинации НПВС и ЭМГПС, по сравнению группой животных с КИА, которым не вводили изучаемые средства. Так, усиление эффекта эторикоксиба проявляется в увеличении периода снижения тяжести артрита в сравнении с группой мышей с КИА, которым вводили растворитель (p ≤ 0,05), до 17 суток против 3 суток при применении только эторикоксиба. Комбинация диклофенака натрия и ЭМГПС задерживала манифестацию симптомов артрита при ежедневном введении в течение 3 суток, тогда как диклофенак натрия такого действия не оказывал. Комбинации НПВС и ЭМГПС значимо повышали порог болевой чувствительности животных с КИА по сравнению с группой мышей с КИА, которым не вводили изучаемые средства, на 7-е сутки введения, тогда как НПВС при курсовом введении в дозе 1 мг/кг не снижали выраженность гипералгезии у мышей с КИА. При этом порог болевой реакции животных с КИА, которым вводили комбинацию диклофенака натрия и ЭМГПС, был значимо выше, чем болевой порог реакции животных, которым вводили только диклофенак натрия. Необходимо отметить, что у мышей с КИА, которым вводили только НПВС, зарегистрирован локомоторный дефицит, чего не наблюдали в группах животных, которым вводили комбинации НПВС и ЭМГПС.

Со снижением выраженности симптомов КИА у мышей BALB/c, которым вводили НПВС, ЭМГПС и их комбинации, вероятно, связан и меньший дисбаланс активности ферментов антиоксидантной защиты по сравнению с группой мышей с КИА, которым вводили растворитель. Способность ЭМГПС усиливать эффективность НПВС мы объясняем его мембранопротекторным, антиоксидантным действием, а также его влиянием на активность фосфолипазы А2, так как известно, что ЭМГПС снижает активность фосфолипазы А2 при панкреатите у собак [25]. Комплексным механизмом цитопротекторного действия ЭМГПС предположительно обусловлен его хондропротекторный эффект, о котором судили по способности изучаемых средств уменьшать повышенный при КИА уровень маркера распада коллагена оксипролина в сыворотке крови мышей BALB/c с КИА на 21-е сутки после разрешающей инъекции бычьего коллагена II типа. Диклофенак натрия, в отличие от ЭМГПС, незначимо корригировал этот показатель, а эторикоксиб значимо повышал уровень оксипролина в сыворотке крови мышей BALB/c с КИА. Известно, что эторикоксиб влияет на микроструктуру и биомеханические свойства субхондральной кости и способствует потере её массы у мышей с моделью ранней стадии остеоартрита [26]. Применение ЭМГПС совместно с НПВС благоприятно влияет на концентрацию оксипролина в сыворотке крови мышей BALB/c с КИА: введение ЭМГПС совместно с диклофенаком натрия приводит к значимому снижению уровня маркера распада коллагена, с эторикоксибом — предупреждает повышение уровня оксипролина в сыворотке крови мышей BALB/c с КИА.

Таким образом, комбинированное применение ЭМГПС с диклофенаком натрия и эторикоксибом повышает эффективность и безопасность этих НПВС на модели коллаген-индуцированного артрита у мышей BALB/c. Полученные данные свидетельствуют о целесообразности дальнейших исследований эффектов ЭМГПС в комбинации с НПВС в малых дозах при артритах. Уменьшение терапевтических доз НПВС при применении совместно с ЭМГПС обеспечит эффективность НПВС и их бóльшую безопасность, так как НЯ при использовании НПВС снижают качество жизни и даже представляют угрозу здоровью у отдельных категорий пациентов.