Введение

Дилепт, метиловый эфир N-капроил-L-пролил- L-тирозина —оригинальный дипептидный атипичный нейролептик, разработанный в ФГНБУ «НИИ фармакологии имени В.В. Закусова». В основе химической структуры лежит аминокислотная последовательность Pro-Tyr, фрагмент нейротензина —эндогенного тридекапептида, играющего важную роль в патогенезе шизофрении [1].

Дилепт обладает антипсихотической активностью, а также проявляет положительный мнемотропный эффект, что позволяет прогнозировать его эффективность не только в отношении негативной симптоматики шизофрении, а также при купировании психотических расстройств при болезни Альцгеймера [2].

Необходимым этапом разработки Дилепта явилась доклиническая оценка его безопасности.

Цель исследования

Оценка хронической токсичности Дилепта, а также его аллергизирующих и противовоспалительных свойств.

Материалы и методы

Хроническую токсичность Дилепта оценивали на самцах и самках беспородных белых крыс массой 180—200 г и кроликах породы шиншилла массой 1,5—2 кг.

Аллергизирующие свойства Дилепта исследованы в экспериментах на морских свинках альбиносах массой 250—300 г, противовоспалительные эффекты на мышах СВА массой 18—20 г.

Все животные были получены из сертифицированных питомников и содержались в условиях вивария ФГБНУ «НИИ фармакологии имени В.В. Закусова» при свободном доступе к воде и корму.

При оценке хронической токсичности препарат в виде суспензии на 1% крахмале вводили крысам и кроликам перорально 1 раз в сутки в течение шести месяцев в дозе, соответствующей терапевтической — 16 мг/кг и превышающей её в десять раз —160 мг/кг. При оценке аллергенности препарат использовали в тех же дозах по стандартным схемам иммунизации, в экспериментах по выявлению противовоспалительной активности Дилепт вводили в/б дозах 0,1 и 10 мг/кг.

Объём и продолжительность исследования, набор использованных методов, регистрируемых параметров и другие условия проведения исследования регламентировались соответствующим Руководством [3]. В экспериментах использовали современное лабораторное оборудование, прошедшее соответствующую поверку; электрокардиограф ЭК 1Т-03М, гемоанализатор (Лаборскель), установка «Открытое поле». Биохимический анализатор Stat Fax, анализатор мочи Clinitek Status, компьютеризированная система микроскопии МЕКОС-Ц1 и др.

Все анализы выполнялись до начала эксперимента, через 3 и 6 месяцев, не позже 24 ч после последнего введения препарата, за исключением «отставленной» группы, в которой измерения выполняли через 30 дней после последнего введения препарата.

Всех животных опытных и контрольных групп подвергали патологоанатомическому вскрытию с последующей оценкой микроскопической картины важнейших внутренних органов.

Изучение аллергизирующих и противовоспалительных свойств Дилепта проводили согласно методическим рекомендациям [4].

Статистический анализ полученных данных проводили с использованием программы Statistica 10.

Результаты выражали в виде средней арифметической и её средней ошибки, проверку данных на нормальность распределения выборок определяли по критерию Шапиро-Уилка, статистическую обработку экспериментальных данных проводили с помощью непарного t-критерию Стьюдента.

Результаты и их обсуждение

В результате проведённого исследования установлено, что 6-месячное введение Дилепта крысам и кроликам обоего пола в дозах 16 и 160 мг/кг перорально не вызывает выраженных изменений массы тела, общего состояния и поведенческих реакций животных в тесте «открытое поле». Дилепт не влияет на биохимические показатели сыворотки крови экспериментальных животных и физико-химические свойства мочи у крыс, за исключением увеличения содержания креатинина в моче, которое имеет обратимый характер. Дилепт в использованных дозах не вызывает выраженных изменений показателей ЭКГ. В ходе эксперимента не установлено влияния препарата на ритм, глубину и частоту дыхания у исследованных животных.

Дилепт не оказывает повреждающего действия на систему крови, за исключением появления дегенеративных форм эритроцитов у крыс, получавших препарат в дозе 160 мг/кг. Так, в крови самцов и самок отмечалось уменьшение количества дискоидных нор- моцитов и появление пойкилоцитных форм (рис. 1), у самцов число анизохромных эритроцитов было значимо выше контрольного показателя (рис. 2). Однако выявленные изменения были обратимы и не наблю-дались у крыс «отставленной» группы, исследованных через месяц после отмены препарата (табл. 1).

Описанные данные согласуются с результатами гистологических исследований селезёнки, где обнаружено значительное увеличение содержания гемосидерина, пигмента, образующегося при ускоренном распаде эритроцитов и выбросе гемоглобина.

Кроме того, после шестимесячного введении препарата в дозе 160 мг/кг отмечены дистрофические процессы различной степени выраженности в печени (рис. 3), почках (рис. 4) и сердце, однако, как показали исследования животных «отставленной» группы эти изменения носят обратимый характер.

При изучении аллергизирующих свойств Дилепта было установлено, что его введение в дозах 16 и 160 мг/кг не приводило к усилению реакции общей анафилаксии у животных опытных групп на белок куриного яйца (БКЯ). При иммунизации морских свинок Дилептом в дозах 16 и 160 мг/кг в смеси с полным адъювантом Фрейнда аллергических реакций не обнаружено. Однократное введение Дилепта в дозе 16 мг/кг не оказывало значимого влияния на реакцию воспаления на конканавалин А (Кон А). Однократное пероральное введение препарата в дозе 160 мг/кг вы-зывало выраженное подавление реакции воспаления на Кон А на 42,9%.

Таким образом, Дилепт при введении в дозах 16 мг/кг и 160 мг/кг не вызывает аллергических реакций немедленного и замедленного типа и псевдоаллергических реакций и оказывает противовоспалительное действие при пероральном введении в дозе 160 мг/кг.

Известно, что при хронизации воспалительного процесса возникает усиление синтеза провоспалительных цитокинов, нарушение баланса Th1 и Th2 хелперов, что приводит к выраженным неврологическим нарушениям и онкологическим заболеваниям. В последние годы накопилось достаточное количество данных, свидетельствующих о вовлеченности воспалительных реакций в патогенез психических и нейродегенеративных заболеваний, в частности повышение содержания провоспалительного ИЛ-6 у пациентов с болезнью Альцгеймера и Паркинсона может служить молекулярным диагностическим маркером этих заболеваний [7, 8]. Участие воспаления в патогенезе и симптомообразовании болезни Альцгеймера и Паркинсона, предполагает необходимость исследования потенциальных терапевтических возможностей противовоспалительных препаратов при этих заболеваниях. В связи с этим, для нейролептиков актуально наличие сопряжённой противовоспалительной активности.

При изучении противовоспалительной активности в реакции воспаления на Кон А препарата Дилепт, который вводили в/б однократно в дозах 0,1 мг/кг и 10 мг/кг, и препарат сравнения Диклофенак, который вводили в/б в дозе 10 мг/кг, было установлено, что Дилепт обладает выраженной противовоспалительной активностью по сравнению с препаратом сравнения Диклофенак (рис. 5).

Таким образом, 6-месячное изучение хронической токсичности препарата Дилепт при пероральном введении в дозах 16 и 160 мг/кг в не выявило токсических эффектов препарата за исключением дистрофических явлений в почках, печени и сердце и появления дегенеративных форм эритроцитов и увеличения содержания креатинина в моче у крыс, получавших препарат в дозе 160 мг/кг. Указанные изменения имели обратимый характер. При введении препарата в дозах 16 мг/кг и 160 мг/кг не обнаружено аллергических реакций немедленного и замедленного типа и псевдоаллергических реакций. Дилепт в малых дозах при в/б введении обладает выраженной противовоспалительной активностью, что, возможно, является составляющей его комплексного нейротропного действия.