Введение

М-11 — окисленный по морфолиновому кольцу основной метаболит афобазола [1], является лигандом МТ-3 подтипа мелатониновых рецепторов [2]. Экс-пери ментально показано, что М-11, как и афобазол, проявляет цитопротекторные свойства на модели зависимых от хинон-редуктазы клеточных повреждений костного мозга [3]. Эффективность М-11 и афобазола на данной модели обусловлена их влиянием на МТ3-рецепторы, которые идентичны регуляторному участку фермента хинон-редуктазы-2, участвующего в процессах детоксикации высокореактивных хинонов и предохраняющего клетки от воздействия свободных радикалов [4]. Известно, что образование повреждающих клеточные мембраны реактивных форм кислорода усиливается при воспалительных процессах [5], а некоторые соединения, обладающие антиоксидантными цитопротекторными свойствами, способны проявлять также и противовоспалительное действие [6, 7].

Целью данного исследования является оценка влияния основного метаболита афобазола М-11 на острое экссудативное воспаление и сопровождающую его развитие висцеральную боль в эксперименте на мышах.

Материалы и методы

Эксперименты проводились на половозрелых аутбредных мышах-самцах массой 28—31 г, полученных из питомника «Столбовая», в весенне-летний период. В течение двух недель до начала эксперимента животных содержали в стандартных условиях вивария при свободном доступе к корму и воде при 12-часовом световом режиме. Содержание животных осуществлялось в соответствии с нормативным документом «Санитарные правила по устройству, оборудованию и содержанию вивариев» от 06.04.1973 г., № 1045—73. Организация и проведение работы выполнялись в соответствии с международными и российскими нормативно-правовыми документами: Приказом Минздравсоцразвития РФ № 708н от 23 августа 2010 г. «Об утверждении правил лабораторной практики» и «Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях от 18 марта 1986 г. (Страсбург).

Влияние основного метаболита афобазола М-11 на периферическое воспаление изучалось в сравнении с диклофенаком натрия на модели острой экссудативной реакции у мышей — перитоните, который вызывали внутрибрюшинным введением 1% раствора уксусной кислоты из расчёта 1 мл на 100 г массы тела животного [8]. Через 3 часа мышей подвергали эвтаназии методом цервикальной дислокации, вскрывали брюшную полость, собирали экссудат и измеряли его массу. О наличии у изучаемых соединений противовоспалительного действия судили по снижению средней массы экссудата относительно контрольной группы.

Висцеральная боль также оценивалась после внутрибрюшинного введения мышам 1% раствора уксусной кислоты, который вызывает химическое болевое раздражение, проявляющееся специфическими болевыми движениями животных — корчами [8]. В течение 15 мин после введения раствора уксусной кислоты для каждого животного подсчитывалось количество корчей. О наличии у изучаемых соединений противоболевого действия судили по снижению количества корчей относительно контрольной группы. В качестве дополнительного критерия, позволяющего оценить болевую чувствительность у животных, регистрировался латентный период наступления корчей после введения им раствора уксусной кислоты.

Исследуемые вещества вводили внутрь за час до инъекции раствора уксусной кислоты: мышам контрольной группы вводили физиологический раствор, мышам группы препарата сравнения — диклофенак натрия в дозе 10 мг/кг, животным опытных групп — основной метаболит афобазола М-11 в дозах 1, 5, 10, 20 и 40 мг/кг.

Статистическую обработку проводили с помощью программы Statistica. 8.0. В каждой экспериментальной группе было от 6 до 16 животных. Нормальность распределения проверяли с помощью критерия Шапиро-Уилка, гомогенность дисперсий групп — с помощью критерия Левена. При нормальном распределении и выполнении теста на гомогенность дисперсий Левена для дальнейшей обработки использовали параметрический критерий Ньюмана-Кейлса, при ненормальном распределении или невыполнении теста на гомогенность дисперсий дальнейшую статистическую обработку проводили с помощью метода непараметрической статистики — критерия Манна-Уитни. Результаты в диаграмме на рисунке представлены как среднее ± ошибка среднего — Mean ± SEM, в таблицах — как среднее ± ошибка среднего (стандартное отклонение) — Mean ± SEM (SD) и медиана, 25%-75% процентилли — Mediana, 25%-75%. Различия между группами считали достоверными при p<0,05.

Результаты и обсуждение

Введение 1% раствора уксусной кислоты (внутрибрюшинно) вызывало у мышей контрольной группы развитие выраженного экссудативного воспаления в брюшной полости, что выражалось в образовании в среднем 879,6 мг экссудата (рис. 1).

Основной метаболит афобазола М-11 в дозах 1 и 5 мг/кг уменьшал образование перитонеального экссудата у мышей соответственно на 18,9 и 16,1% относительно значения контрольной группы, однако это снижение имело характер тенденции (p<0,1). В дозе 10 мг/кг М-11 проявлял достоверное противовоспалительное действие, уменьшая среднюю массу экссудата по сравнению с показателем контрольных животных на 20,3%. Однако дальнейшее повышение дозы М-11 до 20 и 40 мг/кг не приводило к увеличению антиэкссудативной активности соединения: в этих дозах М-11 не влиял на образование экссудата в брюшной полости мышей с уксуснокислым перитонитом (рис. 1).

Препарат сравнения диклофенак натрия в дозе 10 мг/кг проявил выраженное противовоспалительное действие, достоверно снизив массу перитонеального экссудата на 58,4% по сравнению с контрольной группой (см. рис. 1). При этом масса экссудата у мышей, получавших диклофенак натрия, была также достоверно ниже массы экссудата у животных, получавших основной метаболит афобазола М-11 во всех изучаемых дозах.

Внутрибрюшинное введение животным раствора уксусной кислоты приводило к появлению у них выраженной боли, проявлявшейся в специфических реакциях — корчах, количество которых в контрольной группе в среднем составляло 74,6 за 15 мин наблюдения (табл. 1). Основной метаболит афобазола М-11 во всех изучаемых дозах не обнаружил противоболевого действия. Более того, в дозах 5 и 10 мг/кг он достоверно усиливал выраженность висцерального болевого раздражения животных, увеличивая среднее количество корчей соответственно на 27,7 и 14,4% относительно контрольной группы. Вместе с тем, М-11 достоверно не изменял латентный период начала корчей. Полученные результаты согласуются с ранее полученными данными о способности афобазола в дозах 1 и 10 мг/кг ослаблять анальгетическое действие морфина [9].

Препарат сравнения диклофенак натрия вызывал достоверное снижение выраженности висцеральной болевой реакции (количества корчей) на 58,0% и повышал латентный период начала корчей на 31,6% (p<0,05) относительно контрольной группы (табл. 1).

Выводы

1. Основной метаболит афобазола М-11 в дозах 1,5 и 10 мг/кг при введении внутрь мышам снижает выраженность экссудативной стадии воспаления, оказывая в дозе 10 мг/кг достоверный эффект по срав-нению с контролем. По эффективности М-11 в дозе 10 мг/кг уступает препарату сравнения диклофенаку натрия в дозе 10 мг/кг.

2. М-11 в дозах от 1 до 40 мг/кг (при введении внутрь) не проявляет противоболевого действия на модели острой висцеральной боли у мышей.