Введение

На процессы изменения концентраций лекарственных препаратов, их взаимодействие и метаболизм, т.е. освобождение организма от любых ксенобиотиков, огромное значение оказывают процессы биотрансформации и экскреции. Иначе говоря, эффективность и безопасность любого лекарственного средства во многом обусловлена процессами биотрансформации и выведения, которое осуществляется различными путями. Соответственно, изучение процессов экскреции является важным и обязательным этапом исследования любого  биологически активного вещества, предлагаемого к использованию в качестве лекарственного средства [1, 2].

Из ряда 9-производных аденина, синтезированных на кафедре фармацевтической и токсикологической химии ВолгГМУ в результате скрининговых исследований было выбрано вещество лидер по противовирусной активности – соединение VMA-99-82 (адепрофен). Данное соединение продемонстрировало высокую ингибиторную активность в отношении различных ДНК- и РНК-содержащих вирусов, в частности цитомегаловируса человека и ВИЧ-1 [3-5].

Таким образом, целью данной работы явилось изучение процессов экскреции нового производного аденина – соединения VMA-99-82.

Методы исследования

Эксперименты выполнены на 50 белых беспородных крысах-самцах массой 180-220 г, которые содержались в условиях вивария на стандартной диете с соблюдением всех правил и Международных рекомендаций Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых при экспериментальных исследованиях. Содержание изучаемого соединения определяли в моче и кале. Сбор проб мочи и кала осуществляли в метаболических камерах «Термопласт» (Италия).

Соединение  VMA-99-82 вводили крысам внутривенно и перорально в высшей терапевтической дозе 50 мг/кг. Сбор проб мочи и кала осуществлялся в течение 3 суток каждые 24 ч. Сбор проб в контрольной группе животных проводился в течение 24 ч [6].

Для количественного определения соединения  VMA-99-82 был использован метод ВЭЖХ, жидкостной хроматограф (Shimadzu, Япония). Определение проводили при помощи диодноматричного ультрафиолетового детектора, длина волны 205 нм. Хроматографическое разделение осуществлялось на колонке SUPELCOSIL LC-18 (5 мкм; 150 мм×4,6мм). Время удерживания составило около 7,0-7,5 мин. Чувствительность метода – 1 мкг/мл, средняя ошибка измерения не превышает 10%.

Статистическую обработку результатов проводили при помощи компьютерной программы Microsoft Excel [7].

Результаты исследования

При изучении экскреции препарата было выявлено, что VMA-99-82 определяется в моче при внутривенном пути введения в течение не менее 72 ч исследования. При этом максимум выведения приходится на 2 сутки после введения (рис. 1). С мочой выделилось менее 1% неизмененной субстанции от общего количества введенного препарата. Почечный клиренс составляет 0,936 мл/ч, внепочечный – 666,04 мл/ч, то есть значительно превышает ренальный.

При исследовании экскреции VMA-99-82 с содержимым кишечника было обнаружено, что максимальное выделение препарата приходится на 2 сутки исследования (рис. 1). Соединение определяется не менее 72 ч. Суммарная экскреция неизменённой субстанции в 5 раз ниже таковой в моче, что свидетельствует о низкой степени участия данного пути выведения в процессах элиминации препарата в организме крыс.

Рис. 1. Содержание препарата VMA-99-82 в моче и кале крыс при внутривенном введении в дозе 50 мг/кг

После перорального введения крысам VMA-99-82 определяется в моче в течение не менее 72 ч исследования. При этом максимум выведения приходится на 1 сутки после введения (рис. 2). Почечный клиренс составляет 1,8 мл/ч, внепочечный – 1009,72 мл/ч.

При исследовании экскреции VMA-99-82 с содержимым кишечника было обнаружено, что максимальное выделение препарата также приходится на 1 сутки исследования (рис. 2). Соединение определяется в течение 48 ч.

Картина экскреции несколько отличается от таковой при внутривенном пути введения, и основная часть выведения происходит в первые сутки исследования, но количество неизменённой субстанции, выделяемой с мочой и калом также крайне незначительно (менее 1%).

При пероральном введении крысам было установлено, что VMA-99-82 быстро всасывается из желудочно-кишечного тракта, максимум концентрации достигается через 30 мин после введения.

Рис. 2. Содержание препарата VMA-99-82 в моче и кале крыс при пероральном введении в дозе 50 мг/кг

Установленное в результате проведённых исследований значительное превосходство внеренального клиренса над ренальным коррелирует с полученными ранее данными о характере распределения соединения VMA-99-82 в органы и ткани. Препарат определялся в почках в низких концентрациях и при внутривенном и при пероральном путях введения. Тканевая доступность составила 0,452 и 0,413 при внутривенном и пероральном путях введения соответственно.

Длительное время определения изучаемого соединения в экскретах соотносится с установленными ранее данными о длительной циркуляции в крови и высоких значениях периода полувыведения (11 и 6,5 ч для внутривенного и перорального пути введения, соответственно).

Низкие значения элиминации неизменённой субстанции с мочой и калом могут свидетельствовать о выраженной способности вещества подвергаться процессам биотрансформации в организме и о высоком значении эффекта «первого прохождения через печень».