phkineticaФармакокинетика и ФармакодинамикаPharmacokinetics and Pharmacodynamics2587-78362686-8830ООО «Издательство ОКИ»10.37489/2587-7836-2026-2-30-36MQAWNPphkinetica-526Research ArticleПОИСК НОВЫХ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ СОЕДИНЕНИЙSCREENING FOR NEW PHARMACOLOGICALLY ACTIVE COMPOUNDSПротивовирусная активность новых фосфорорганических соединений in vitroAntiviral activity of new organophosphorus compounds in vitrohttps://orcid.org/0009-0004-7041-8194ЗиминМ. С.ZiminM. S.

Зимин Максим Сергеевич – аспирант кафедры фармакологии и клинической фармакологии

 Ярославль

Maxim S. Zimin – postgraduate student, Department of Pharmacology and Clinical Pharmacology

Yaroslavl

maxim.simin2000@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0001-6048-8974ЛилееваЕ. Г.LileevaE. G.

Лилеева Елена Георгиевна – к. м. н., доцент, зав. базовой кафедрой инновационной фармации

Ярославль

Elena G. Lileeva – PhD, Cand. Sci. (Med.), Associate Professor, Head of the Innovative Pharmacy Department

Yaroslavl

elileeva2006@yandex.ruФГБОУ ВО «Ярославский государственный медицинский университет»РоссияYaroslavl State Medical UniversityRussian Federation202630062026023036Copyright © Зимин М.С., Лилеева Е.Г., 20262026Зимин М.С., Лилеева Е.Г.Zimin M.S., Lileeva E.G.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.pharmacokinetica.ru/jour/article/view/526Актуальность

Актуальность. Поиск новых противовирусных соединений остаётся приоритетной задачей в связи с ростом резистентности патогенов. Фосфонаты, характеризующиеся стабильной связью углерод–фосфор, представляют собой перспективный класс фосфорорганических производных. Однако данные о противовирусной активности новых синтетических фосфонатов в отношении альфагерпесвирусов ограничены.

Цель исследования

Цель исследования. Оценка цитотоксичности и противовирусной активности пяти новых фосфонатов (SAN-1, SAN-2, SAN-3, SAN-4 и DII-C2) в отношении вируса псевдобешенства (SuHV-1) на культуре клеток Vero.

Методы

Методы. Инфекционный титр вируса определяли по методу Рида и Менча. Цитотоксичность оценивали с помощью визуальной микроскопии и количественного МТТ-теста через 72 ч инкубации. Противовирусную активность изучали по снижению вирус-индуцированного цитопатического действия (ЦПД) и уменьшению титра вируса (lg ТЦД₅₀/мл) с расчётом по методу Спирмена–Кербера. Все соединения тестировали в диапазоне концентраций 100–0,0001 мкг/мл.

Результаты

Результаты. Титр вируса SuHV-1 составил 7,08±0,17 lg ТЦД₅₀/мл, что подтвердило пригодность вирусной суспензии для скрининга. Ни один из тестируемых фосфонатов не проявил цитотоксичности в концентрациях до 100 мкг/мл; жизнеспособность клеток варьировала от 92 до 96 % по сравнению с интактным контролем. Четыре соединения (SAN-2, SAN-3, SAN-4 и DII-C2) показали выраженную противовирусную активность, обеспечивая защиту клеточного монослоя на уровне 72–82,5 % и снижение титра вируса на 2,25–2,63 lg. Соединение SAN-1 продемонстрировало слабую активность (защита клеток 20 %). Наилучший эффект зафиксирован для DII-C2 (82,5 % защиты).

Заключение

Заключение. Фосфонаты SAN-2, SAN-3, SAN-4 и DII-C2 обладают низкой цитотоксичностью и значимой противогерпесвирусной активностью in vitro. Данные соединения являются перспективными кандидатами для дальнейшего доклинического изучения в качестве потенциальных противовирусных средств.

Background

Background. The search for new antiviral compounds is a priority due to growing pathogen resistance. Phosphonates, characterized by a stable carbon–phosphorus bond, represent a promising class of organophosphorus derivatives. However, data on the antiviral activity of newly synthesized phosphonates against alphaherpesviruses remain limited.

Objective

Objective. To evaluate the cytotoxicity and antiviral activity of five novel phosphonates (SAN-1, SAN-2, SAN-3, SAN-4, and DII-C2) against pseudorabies virus (SuHV-1) in Vero cell culture.

Methods

Methods. The infectious virus titer was determined using the Reed–Muench method. Cytotoxicity was assessed by visual microscopy and quantitative MTT assay after 72 h of incubation. Antiviral activity was evaluated by measuring the reduction of virus-induced cytopathic effect (CPE) and calculating virus titer reduction (log₁₀ TCID₅₀/mL) using the Spearman–Kärber method. All compounds were tested at a concentration range of 100–0.0001 μg/mL.

Results

Results. The SuHV-1 virus titer was 7.08±0.17 lg TCID₅₀/mL, confirming its suitability for screening. None of the tested phosphonates exhibited cytotoxicity at concentrations up to 100 μg/mL, with cell viability ranging from 92 to 96 % relative to untreated controls. Four compounds (SAN 2, SAN 3, SAN 4, and DII C2) showed pronounced antiviral activity, providing 72–82.5 % cell protection and reducing virus titers by 2.25–2.63 log₁₀. SAN 1 demonstrated weak activity (20 % protection). The highest efficacy was observed for DII C2 (82.5 % protection).

Conclusion

Conclusion. SAN 2, SAN 3, SAN 4, and DII C2 exhibit low cytotoxicity and significant anti SuHV 1 activity in vitro. These compounds are promising candidates for further preclinical studies as potential antiviral agents.

фосфонатыцитотоксическая активностьпротивовирусное действиевирус псевдобешенства (болезнь Ауески)клетки Verophosphonatescytotoxicityantiviral activitypseudorabies virus (Aujeszky's disease)Vero cellsReferencesНикитина А.В. Соединения на основе фосфорильного фрагмента с четырехкоординированным атомом фосфора — оптимальная платформа для создания лекарственных препаратов с различным спектром психотропной активности: диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук. Москва; 2024. 116 с.Nikitina AV. Compounds based on a phosphoryl fragment with a tetracoordinated phosphorus atom — creating an optimal platform for drugs with a diverse spectrum of psychotropic activity: dissertation for the degree of candidate of medical sciences. Moscow; 2024. (In Russ.).Михайлова А.К., Симакова О.И. Фосфорорганические соединения и их основные свойства, перспективы их применения. В: Горохов АА, (ред.) Проблемы и перспективы развития России: Молодежный взгляд в будущее: сборник научных статей Всероссийской научной конференции. Курск, 17–18 октября 2018 г. Том 4. Курск: Университетская книга; 2018. С. 109-111Mikhailova AK, Simakova OI. Organophosphorus compounds and their main properties, prospects for their application. In: Gorokhov AA, (ed.) Problems and Prospects of Development of Russia: A Youth Look into the Future: Collection of scientific articles from the All-Russian Scientific Conference. Kursk, October 17–18, 2018. Vol. 4. Kursk: University Book; 2018. Pp. 109-111. (In Russ.). EDN: VLOEEEНифантьев Э.Е. Химия фосфорорганических соединений. Москва: Изд-во Моск. ун-та; 1971. 350 с.Nifantiev EE. Chemistry of organophosphorus compounds. Moscow: Publishing house Mosk. university; 1971. 350 p. (In Russ.).Кравченко А.В., Куимова У.А., Ефремова О.С. и др. Сравнение эффективности и безопасности схем антиретровирусной терапии первой линии, включавших фосфазид или тенофовир. Журнал инфектологии. 2018;10(4):37-41.Kravchenko AV, Kuimova UA, Efremova OS, et al. Comparison of efficacy and safety of antiretroviral first-line therapy with phosphazideortdf. Journal Infectology. 2018;10(4):37-41. (In Russ.). doi: 10.22625/2072-6732-2018-10-4-37-41.Демин М.В., Тихомиров Д.С., Туполева Т.А., Филатов Ф.П. Устойчивость к противовирусным препаратам у вирусов человека из подсемейства Betaherpesvirinae. Вопросы вирусологии. 2022;67(5):385-394.Demin MV, Tikhomirov DS, Tupoleva TA, Filatov FP. Resistance to antiviral drugs in human viruses from the subfamily Betaherpesvirinae. Problems of Virology. 2022;67(5):385-394. (In Russ.). doi: 10.36233/0507-4088-136.Лилеева Е.Г., Давлетшин Р.Р., Лысенко А.С. и др. Определение цитотоксичности новых фосфонатов на культуре клеток Vero. Медицина. Социология. Философия. Прикладные исследования. 2025(6):358-359.Lileeva EG, Davletshin RR, Lysenko AS, et al. Determination of cytotoxicity of new phosphonates on Vero cell culture. Medicine. Sociology. Philosophy. Applied Research. 2025(6):358-359. (In Russ.). EDN MLRXEXГалеев Р.Р., Лилеева Е.Г., Пузина О.А. и др. Валидация методики определения титра вируса болезни Ауески на культуре клеток Vero B. Вестник Росздравнадзора. 2024;(6):83-87.Galeev RR, Lileeva EG, Puzina OA, et al. Validation of the methodology for determining the titer of the Aujeski disease virus on Vero B cell culture. Vestnik Roszdravnadzora. 2024;(6):83-87. (In Russ.). EDN: OOHTCTКаа К.В., Игнатьев Г.М., Синюгина А.А., Ишмухаметов А.А. Чувствительность клеточных линий к вирусу Чикунгунья и подбор метода наработки вирусного материала в промышленных объемах. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2023;23(1):111-120.Kaa KV, Ignatyev GM, Sinyugina AA, Ishmukhametov AA. Susceptibility of various cell lines to the Chikungunya virus and method selection for commercial-scale production of viral material. Biological Products. Prevention, Diagnosis, Treatment. 2023;23(1):111-120. (In Russ.). doi: 10.30895/2221-996X-2023-23-1-111-120.Миронов А. Н. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая. / А. Н. Миронов [и др.]. М. : Гриф и К, 2012. — 944 с.Mironov AN. Guidelines for conducting preclinical studies of drugs. Part one. / AN. Mironov [et al.]. M.: Grif i K, 2012. (In Russ.).Шишацкая Е.И., Николаева Е.Д., Шумилова А.А. и др. Культивирование мультипотентных мезенхимных стромальных клеток костного мозга на носителях из резорбируемого Биопластотана. Гены и Клетки. 2013;8(1):57-65.Shishatskaya EI, Nikolaeva ED, Shumilova AA, et al. Cultivation of multipotent mesenchymal bone marrow cells on matrixes made of resorbable Bioplastotan. Genes & Cells. 2013;8(1):57-65. (In Russ.). doi: 10.23868/gc121612. EDN: QAKUPNЛилеева Е.Г., Давлетшин Р.Р., Зимин М.С. и др. Определение противовирусного действия новых фосфонатов с концентрацией 100 мкг/мл на модели герпетической инфекции, с использованием вируса псевдобешенства (Ауески) на культуре клеток Vero. Международный журнал медицины и психологии. 2026;9(2):65-70.Lileeva EG, Davletshin RR, Zimin MS, et al. Determination of the antiviral activity of new phosphonates at a concentration of 100 μg/ml in a herpes infection model using the Aujeszky’s virus in Vero cell culture. International Journal of Medicine and Psychology. (In Russ.). doi: 10.58224/2658-3313-2026-9-2-65-70.Абрамова Е.Г., Гаврилова Ю.К., Генералов С.В. и др. Разработка стандартного образца предприятия активности антирабического иммуноглобулина для применения в реакции нейтрализации вируса на культуре клеток Vero. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2022;22(1):38-48.Abramova EG, Gavrilova YuK, Generalov SV, et al. Development of an in-house reference standard for anti-rabies immunoglobulin potency, to be used in the virus neutralisation test in a Vero cell culture. Biological Products. Prevention, Diagnosis, Treatment. 2022;22(1):38-48. (In Russ.). doi: 10.30895/2221-996X-2022-22-1-38-48.ОФС.1.7.2.0002.15. Общая фармакопейная статья. Биологические методы испытания препаратов интерферона с использованием культур клеток: утверждена Приказом Минздрава России № 771 от 29.10.2015: введена в действие с 01.01.2016 // Государственная фармакопея Российской Федерации. XIII издание.OFS.1.7.2.0002.15. General Pharmacopoeia Article. Biological Testing Methods for Interferon Preparations Using Cell Cultures: approved by Order of the Ministry of Health of Russia No. 771 dated October 29, 2015: entered into force on January 1, 2016. State Pharmacopoeia of the Russian Federation. XIII edition. (In Russ.). Режим доступа: URL: https://pharmacopoeia.regmed.ru/pharmacopoeia-projects/izdanie-13/1/1-7/1-7-2/1-7-2-2/?vers=959.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.