phkineticaФармакокинетика и ФармакодинамикаPharmacokinetics and Pharmacodynamics2587-78362686-8830ООО «Издательство ОКИ»10.37489/2587-7836-2023-1-58-64phkinetica-359Research ArticleДОКЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ФАРМАКОДИНАМИКИPRECLINICAL PHARMACODYNAMICS STUDIESВалидация тест-системы для количественного определения концентрации трастузумаба (Герцептин, Гертикад) в биологических жидкостях методом твердофазного иммуноферментного анализаValidation of ELISA Test-system for Trastuzumab (Herceptin, Hertikad) quantitative determination in biological fluidshttps://orcid.org/0000-0003-3212-4369ПисаревВ. В.PisarevV. V.

Писарев Владимир Викторович, Генеральный директор

Москва

Pisarev Vladimir V., General manager

Moscow

vladimir.pisarev@probiotech.ruhttps://orcid.org/0000-0002-1676-7754ИвановА. В.IvanovA. V.

Иванов Андрей Владимирович, с. н. с.

Москва

Ivanov Andrei V., Senior Researcher

Moscow

gostyatin@gmail.comОбщество с ограниченной ответственностью «Научно-производственный центр Пробиотек»РоссияScientific and Production Center Probiotech LLCRussian Federation202310052023015864Copyright © Писарев В.В., Иванов А.В., 20232023Писарев В.В., Иванов А.В.Pisarev V.V., Ivanov A.V.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.pharmacokinetica.ru/jour/article/view/359

Актуальность. Трастузумаб является препаратом выбора для терапии HER2+ рака молочных желез. Для определения фармакодинамики препарата при персонализированной терапии необходима валидированная биоаналитическая методика определения концентрации препарата в биологических жидкостях. Цель работы: создание и оценка пригодности (валидация) тест-системы на основе твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) для количественного определения концентрации трастузумаба в сыворотке/плазме крови человека. Материалы и методы. Представленная тест-система является классическим ИФА набором с 96-луночным полистероловым планшетом, лунки которого покрыты специфическими к трастузумабу моноклональными антителами, вторичными козьими антителами к Fc фрагменту, конъюгированными с пероксидазой хрена, субстратного раствора — (3,5,3',5')-тетраметилбензидина (ТМБ) и стоп-раствора. Растворы для контроля качества готовились путём разведения известных концентраций трастузумаба в бланковой сыворотке. Результаты. В ходе работы установлены предел обнаружения (0,84 нг/мл) и нижний предел количественного определения (1,41 нг/мл) трастузумаба в сыворотке/плазме крови, доказана высокая селективность определения аналита в многокомпонентной матрице. Найденные средние значения концентраций трастузумаба не отклонялись от номинальных значений на более чем 11,42 % во всём диапазоне определяемых концентраций, внутри- и межсерийная прецизионность тест-системы не превышала 11,31 %, общая ошибка метода — 20,0 %. Продемонстрированные характеристики позволяют применять данную тест-систему для анализа широкого диапазона концентраций трастузумаба в биологических образцах. Стабильность компонентов тест-системы определена как не меньше 1 года при соблюдении условий хранении. Заключение. Представленная тест-система соответствует международным валидационным требованиям и пригодна для практического применения.

Relevance. Trastuzumab is the drug of choice for the HER2+ breast cancer treatment. To determine the trastuzumab pharmacodynamics in personalized therapy a validated bioanalytical method for measuring the concentration of the drug in biological fluids is required. The aim: creation and assessment of the suitability (validation) of a test system based on enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the quantitative determination of trastuzumab concentration in human serum/plasma. Materials and methods. The presented test system is a classic ELISA kit with a 96-well polystyrene plate, the wells of which are coated with monoclonal antibodies specific to trastuzumab, secondary goat antibodies to the Fc fragment conjugated with horseradish peroxidase (HRP), substrate solution — (3,5,3',5')-tetramethylbenzidine (TMB) and stop solution. Quality control solutions were prepared by diluting known concentrations of trastuzumab in blank serum. Results. In the course of the work the limit of detection (0.84 ng/ml) and the lower limit of quantitative determination (1.41 ng/ml) of trastuzumab in serum/plasma were established and the high selectivity of analyte determination in a multicomponent matrix was proved. The found average values of trastuzumab concentrations did not deviate from the nominal values by more than 14 % in the entire range of determined concentrations, the intraand interseries precision of the test system did not exceed 8%, and the total method error was 20.1 %. The demonstrated dilution linearity allows the assay to be used to analyze a wide range of trastuzumab concentrations in biological samples. The stability of the components of the test system is defined as at least 1 year under storage conditions. Conclusion. The presented ELISA test system complies with international validation requirements and it is suitable for practical use.

трастузумабИФАвалидацияфармакокинетикаtrastuzumabELISAvalidationpharmacokineticsReferencesMendes D, Alves C, Afonso N, Cardoso F, Passos-Coelho JL, Costa L, Andrade S, Batel-Marques F. The benefit of HER2-targeted therapies on overall survival of patients with metastatic HER2-positive breast cancer–a systematic review. Breast Cancer Res. 2015;17:140. DOI: 10.1186/s13058-015-0648-2.Mendes D, Alves C, Afonso N, Cardoso F, Passos-Coelho JL, Costa L, Andrade S, Batel-Marques F. The benefit of HER2-targeted therapies on overall survival of patients with metastatic HER2-positive breast cancer–a systematic review. Breast Cancer Res. 2015;17:140. DOI: 10.1186/s13058-015-0648-2.Viani GA, Afonso SL, Stefano EJ, De Fendi LI, Soares FV. Adjuvant trastuzumab in the treatment of her-2-positive early breast cancer: A metaanalysis of published randomized trials. BMC Cancer. 2007;7:153. DOI: 10.1186/1471-2407-7-153.Viani GA, Afonso SL, Stefano EJ, De Fendi LI, Soares FV. Adjuvant trastuzumab in the treatment of her-2-positive early breast cancer: A metaanalysis of published randomized trials. BMC Cancer. 2007;7:153. DOI: 10.1186/1471-2407-7-153.Swain SM, Miles D, Kim S-B, et al. Pertuzumab, trastuzumab, and docetaxel for HER2-positive metastatic breast cancer (CLEOPATRA): End-of-study results from a double-blind, randomised, placebo-controlled, phase 3 study. Lancet Oncol. 2020;21:519–530. DOI: 10.1016/S1470-2045(19)30863-0.Swain SM, Miles D, Kim S-B, et al. Pertuzumab, trastuzumab, and docetaxel for HER2-positive metastatic breast cancer (CLEOPATRA): End-of-study results from a double-blind, randomised, placebo-controlled, phase 3 study. Lancet Oncol. 2020;21:519–530. DOI: 10.1016/S1470-2045(19)30863-0.Eiger D, Agostinetto E, Saúde-Conde R, de Azambuja E. The Exciting New Field of HER2-Low Breast Cancer Treatment. Cancers (Basel). 2021 Mar 1;13(5):1015. DOI: 10.3390/cancers13051015.Eiger D, Agostinetto E, Saúde-Conde R, de Azambuja E. The Exciting New Field of HER2-Low Breast Cancer Treatment. Cancers (Basel). 2021 Mar 1;13(5):1015. DOI: 10.3390/cancers13051015.Bailey TA, Luan H, Clubb RJ, et al. Mechanisms of Trastuzumab resistance in ErbB2-driven breast cancer and newer opportunities to overcome therapy resistance. J Carcinog. 2011;10:28. DOI: 10.4103/1477-3163.90442.Bailey TA, Luan H, Clubb RJ, et al. Mechanisms of Trastuzumab resistance in ErbB2-driven breast cancer and newer opportunities to overcome therapy resistance. J Carcinog. 2011;10:28. DOI: 10.4103/1477-3163.90442.Maple L, Lathrop R, Bozich S, Harman W, Tacey R, Kelley M, Danilkovitch-Miagkova A. Development and validation of ELISA for herceptin detection in human serum. J Immunol Methods. 2004;295(1-2): 169–82. DOI: 10.1016/j.jim.2004.09.012.Maple L, Lathrop R, Bozich S, Harman W, Tacey R, Kelley M, Danilkovitch-Miagkova A. Development and validation of ELISA for herceptin detection in human serum. J Immunol Methods. 2004;295(1-2): 169–82. DOI: 10.1016/j.jim.2004.09.012.Писарев ВВ, Уляшова ММ, Гильдеева ГН. Валидация иммуноферментной тест-системы для доклинических исследований фармакокинетики ритуксимаба. Ведомости Научного центра экспертизы средств медицинского применения. 2019;9(2):131–139. [Pisarev VV, Ulyashova MM, Gildeeva GN. Validation of enzyme immunoassay for preclinical pharmacokinetic trials of rituximab. Vedomosti Nauchnogo tsentra ekspertizy sredstv meditsinskogo primeneniya = The Bulletin of the Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products. 2019;9(2):131–139. (In Russ).]. DOI: 10.30895/1991-2919-2019-9-2-131-139.Писарев ВВ, Уляшова ММ, Гильдеева ГН. Валидация иммуноферментной тест-системы для доклинических исследований фармакокинетики ритуксимаба. Ведомости Научного центра экспертизы средств медицинского применения. 2019;9(2):131–139. [Pisarev VV, Ulyashova MM, Gildeeva GN. Validation of enzyme immunoassay for preclinical pharmacokinetic trials of rituximab. Vedomosti Nauchnogo tsentra ekspertizy sredstv meditsinskogo primeneniya = The Bulletin of the Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products. 2019;9(2):131–139. (In Russ).]. DOI: 10.30895/1991-2919-2019-9-2-131-139.Allinson JL. Clinical biomarker validation. Bioanalysis. 2018 Jun 1;10(12):957–968. DOI: 10.4155/bio-2018-0061.Allinson JL. Clinical biomarker validation. Bioanalysis. 2018 Jun 1;10(12):957–968. DOI: 10.4155/bio-2018-0061.CPMP/ICH/3812/95. Note for guidance on validation of analytical procedures: text and methodology. London: June 1995.CPMP/ICH/3812/95. Note for guidance on validation of analytical procedures: text and methodology. London: June 1995.Руководство по валидации методик анализа лекарственных средств / под ред. Н. В. Юргеля, А. Л. Младенцева, А. В. Бурдейна, М. А. Гетьмана, А. А. Малина. М.: Ассоциация российских фармацевтических производителей, 2007.Rukovodstvo po validacii metodik analiza lekarstvennyh sredstv. Ed by NV Yurgel, AL Mladentsev, AV Bourdain, MA Hetman, AA Malin. Moscow, 2007. (In Russ).Митькина Л.И., Ковалева Е.Л. Подходы к оценке пригодности аналитических методик при проведении экспертизы качества лекарственных средств. Ведомости Научного центра экспертизы средств медицинского применения. 2012;(2):6–9.Mit’kina LI, Kovaleva EL. Approaches to evaluation of analytical methods suitability when performing medicines quality evaluation. Vedomosti Nauchnogo tsentra ekspertizy sredstv meditsinskogo primeneniya. 2012;(2):131–139. (In Russ).Tsurusawa N, Chang J, Namba M, et al. Modified ELISA for Ultrasensitive Diagnosis. J Clin Med. 2021;10(21):5197. DOI: 10.3390/jcm10215197.Tsurusawa N, Chang J, Namba M, et al. Modified ELISA for Ultrasensitive Diagnosis. J Clin Med. 2021;10(21):5197. DOI: 10.3390/jcm10215197.Crowther JR. The ELISA guidebook. Methods Mol Biol. 2000;149: III-IV, 1-413. DOI: 10.1385/1592590497.Crowther JR. The ELISA guidebook. Methods Mol Biol. 2000;149: III-IV, 1-413. DOI: 10.1385/1592590497.Guidance for Industry Immunogenicity Assessment for Therapeutic Protein Products. 2014. Available from: http://www.fda.gov/downloads/Drugs/GuidanceComplianceRegulatoryInformation/Guidances/UCM338856.pdf.Guidance for Industry Immunogenicity Assessment for Therapeutic Protein Products. 2014. Available from: http://www.fda.gov/downloads/Drugs/GuidanceComplianceRegulatoryInformation/Guidances/UCM338856.pdf.Shankar G, Devanarayan V, Amaravadi L, et al. Recommendations for the validation of immunoassays used for detection of host antibodies against biotechnology products. J Pharm Biomed Anal. 2008 Dec 15;48(5):1267–1281. DOI: 10.1016/j.jpba.2008.09.020.Shankar G, Devanarayan V, Amaravadi L, et al. Recommendations for the validation of immunoassays used for detection of host antibodies against biotechnology products. J Pharm Biomed Anal. 2008 Dec 15;48(5):1267–1281. DOI: 10.1016/j.jpba.2008.09.020.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.