phkineticaФармакокинетика и ФармакодинамикаPharmacokinetics and Pharmacodynamics2587-78362686-8830ООО «Издательство ОКИ»phkinetica-190Research ArticleПРОТЕОМНЫЙ АНАЛИЗPROTEOMIC ANALYSISАнализ лёгкой пептидной фракции Лаеннека методами современной протеомикиAnalysis of the light peptide fraction of Laennec by proteomic methodsТоршинИ. Ю.TorshinI. Yu.noemail@neicon.ruЗгодаВ. Г.ZgodaV. G.noemail@neicon.ruГромоваОльга АлексеевнаGromovaO. A.unesco.gromova@gmail.comБарановИ. И.BaranovI. I.noemail@neicon.ruДемидовВ. И.DemidovV. I.noemail@neicon.ruНазаренкоО. А.NazarenkoO. A.noemail@neicon.ruСотниковаН. Ю.SotnikovaN. Yu.noemail@neicon.ruКаримоваИ. М.KarimovaI. M.noemail@neicon.ruФГБОУ ВО «Ивановская государственная медицинская академия» Минздрава РоссииRussian FederationФГБУ «Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова» Минздрава РоссииRussian FederationГБОУ ВПО МГМСУ им. А.И. Евдокимова Минздрава РоссииRussian Federation201609112016043142Copyright © Торшин И.Ю., Згода В.Г., Громова О.А., Баранов И.И., Демидов В.И., Назаренко О.А., Сотникова Н.Ю., Каримова И.М., 20162016Торшин И.Ю., Згода В.Г., Громова О.А., Баранов И.И., Демидов В.И., Назаренко О.А., Сотникова Н.Ю., Каримова И.М.Torshin I.Y., Zgoda V.G., Gromova O.A., Baranov I.I., Demidov V.I., Nazarenko O.A., Sotnikova N.Y., Karimova I.M.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.pharmacokinetica.ru/jour/article/view/190

Препарат Лаеннек основан на стандартизованном гидролизате плаценты человека и отличается высокой эффективностью при регенерации тканей. В настоящем исследовании проведён анализ лёгкой пептидной фракции препарата Лаеннек до 3 000 Да тремя методами: (1) высокоточной масс-спектрометрией на масс-спектрометре Q-Exactive (Thermo Scientific, Германия); (2) иммуноферментным анализом на содержание эпитопов белков посредством иммуноферментного анализа (ИФА, ELISA) с использованием моноклональных антител к IGF-1, TGF-1, HGF, VEGF, PDGF, EGF и др. и хемокинов (IL-8, IL-1a, IL-1b, TNFa, IL-12) и (3) секвенирование выделенных пептидов. Установлена высокая степень стандартизации препарата по пептидам. С использованием стандартного программного обеспечения были установлены аминокислотные последовательности 47 пептидов. Установлено наличие в составе Лаеннека пептидов альбумина, коллагенов Ia2, Va2, XIXa1, «цинковых пальцев», а также активных пептидных фрагментов ростовых факторов IGF-1, TGF-1, HGF, VEGF, PDGF, EGF и др. Наличие этих пептидов в составе Лаеннека позволило сформулировать ряд ранее неизвестных молекулярных механизмов действия препарата.

Laennec preparation is based on standardized human placenta hydrolyzate and is highly effective in the regeneration of tissues. This study presents the results of analysis of the light peptide fraction of Laennec (<3 000 Da) by using three methods: (1) mass spectrometry using Q-Exactive (ThermoScientific, Germany), (2) enzyme immunoassay for the discovery of epitopes of proteins by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) with monoclonal antibodies to IGF-1, TGF-1, HGF, VEGF, PDGF, EGF and chemokines (IL-8, IL-1a, IL-1b, TNFa, IL-12) and (3) peptide sequencing. The results indicated high degree of standardization of Laennec concerning the peptide composition. Amino acid sequences of 47 peptides were established using standard software. The composition of Laennec includes the peptide fragments of albumin, collagens Ia2, Va2, XIXa1, «zinc fingers», regenerative growth factors IGF-1, TGF-1, HGF, VEGF, PDGF, EGF. The presence of these peptides in Laennec allowed us to formulate a number of previously unknown molecular mechanisms of the Laennec action

гидролизат плацентыЛаеннекмасс-спектрометрияиммуноферментный анализсеквенирование пептидовпротеомикаplacenta hydrolyzateLaennecmass spectrometryimmunoassaypeptide sequencingproteomicsReferencesГромова O.A., Торшин И.Ю., Диброва Е.А., Каримова И.М., Гилельс А.В., Kycmoвa E.B. Мировой опыт применение препаратов из плаценты человека, Пластическая хирургия и косметология. 2011; 2: 63-67.Громова O.A., Торшин И.Ю., Диброва Е.А., Каримова И.М., Гилельс А.В., Kycmoвa E.B. Мировой опыт применение препаратов из плаценты человека, Пластическая хирургия и косметология. 2011; 2: 63-67.Воесктапп В., Bairoch A., Apweiler R. et al. The SWISS-PROT protein knowledgebase and its supplement TrEMBL in 2003”. Nucleic Acids Research. 2003; 31 (1): 365-370.Воесктапп В., Bairoch A., Apweiler R. et al. The SWISS-PROT protein knowledgebase and its supplement TrEMBL in 2003”. Nucleic Acids Research. 2003; 31 (1): 365-370.Beyssac I., Martini M.C., Cotte J. Oestrogen identification and dosage in filatov human placenta extracts by high performance liquid chromatography. IntJ Cosmet Sei. 1986; 8 (4): 175-188.Beyssac I., Martini M.C., Cotte J. Oestrogen identification and dosage in filatov human placenta extracts by high performance liquid chromatography. IntJ Cosmet Sei. 1986; 8 (4): 175-188.Juttiard J.H., Shibasaki Т., Ling N., Guillemin R. High-molecular-weight immunoreactive beta-endorphin in extracts of human placenta is a fragment of immunoglobulin G. Science. 1980; 208 (4440): 183-185.Juttiard J.H., Shibasaki Т., Ling N., Guillemin R. High-molecular-weight immunoreactive beta-endorphin in extracts of human placenta is a fragment of immunoglobulin G. Science. 1980; 208 (4440): 183-185.Sastry B. V., Tayeb O. S., Barnwell S.L. Peptides from human placenta: methionine enkephalin and substance P. Placenta Suppl. 1981; 3: 327-337.Sastry B. V., Tayeb O. S., Barnwell S.L. Peptides from human placenta: methionine enkephalin and substance P. Placenta Suppl. 1981; 3: 327-337.Sakura H., Aoki S., Ozawa T. The neuropeptide, head activator, in human placenta and serum from pregnant women. Acta Endocrinol (Copenh). 1991; 125 (5): 454-458.Sakura H., Aoki S., Ozawa T. The neuropeptide, head activator, in human placenta and serum from pregnant women. Acta Endocrinol (Copenh). 1991; 125 (5): 454-458.Громова O.A., ТоршинИ.Ю., Волков А.Ю., Назаренко О.А., Смарыгин A.B. Анализ микроэлементного состава препарата Лаеннек, как основа его фармакологического действия. Эстетическая медицина ипластическаяхирургия. 2011; 1: 43-47.Громова O.A., ТоршинИ.Ю., Волков А.Ю., Назаренко О.А., Смарыгин A.B. Анализ микроэлементного состава препарата Лаеннек, как основа его фармакологического действия. Эстетическая медицина ипластическаяхирургия. 2011; 1: 43-47.Громова О.А., ТоршинИ.Ю., Гилельс А.В., Диброва Е.А., Гришина Т.Р., Волков А.Ю., Лиманова O.A., Томилова И.K., Демидов В.И. Препараты плаценты человека: фундаментальные и клинические исследования. Врач. 2014; 4: 67-72.Громова О.А., ТоршинИ.Ю., Гилельс А.В., Диброва Е.А., Гришина Т.Р., Волков А.Ю., Лиманова O.A., Томилова И.K., Демидов В.И. Препараты плаценты человека: фундаментальные и клинические исследования. Врач. 2014; 4: 67-72.КейтсМ. Техникалипидологии, М.: Мир. 1975; 322.КейтсМ. Техникалипидологии, М.: Мир. 1975; 322.Дарбре А. Практическаяхимиябелка, М.: Мир. 1989; 621.Дарбре А. Практическаяхимиябелка, М.: Мир. 1989; 621.Bar-Or D., Rael L.T., Lau E.P., Rao N.K., Thomas G.W., Winkler J.V., Yukl R.L., Kingston R.G., Curtis C.G. An analog of the human albumin N-terminus (Asp-Ala-His-Lys) prevents formation of copper-induced reactive oxygen species. Biochem Biophys Res Commun. 2001; 284 (3): 856-862.Bar-Or D., Rael L.T., Lau E.P., Rao N.K., Thomas G.W., Winkler J.V., Yukl R.L., Kingston R.G., Curtis C.G. An analog of the human albumin N-terminus (Asp-Ala-His-Lys) prevents formation of copper-induced reactive oxygen species. Biochem Biophys Res Commun. 2001; 284 (3): 856-862.Konitsiotis A.D., Raynal N., Bihan D., Hohenester E., Famdale R.W., Leitinger B. Characterization of high affinity binding motifs for the discoidin domain receptor DDR2 in collagen. J Biol Chem. 2008; 283 (11): 6861-8 doi.Konitsiotis A.D., Raynal N., Bihan D., Hohenester E., Famdale R.W., Leitinger B. Characterization of high affinity binding motifs for the discoidin domain receptor DDR2 in collagen. J Biol Chem. 2008; 283 (11): 6861-8 doi.Carafoli F., Bihan D., Stathopoulos S., KonitsiotisA.D., Kvansakul M., Famdale R. W., Leitinger B., Hohenester E. Crystallographic insight into collagen recognition by discoidin domain receptor 2. Structure. 2009; 17 (12): 1573-81 doi.Carafoli F., Bihan D., Stathopoulos S., KonitsiotisA.D., Kvansakul M., Famdale R. W., Leitinger B., Hohenester E. Crystallographic insight into collagen recognition by discoidin domain receptor 2. Structure. 2009; 17 (12): 1573-81 doi.Vogel W.F., Abdulhussein R., Ford C.E. Sensingextracellular matrix: an update on discoidin domain receptor function. Cell Signal. 2006; 18 (8): 1108-16 Epub 2006 F.Vogel W.F., Abdulhussein R., Ford C.E. Sensingextracellular matrix: an update on discoidin domain receptor function. Cell Signal. 2006; 18 (8): 1108-16 Epub 2006 F.Gross O., Beirowski B., Harvey S.J., McFadden C., Chen D., Tam S., Thorner P.S., Smyth N.,Addicks K., Bloch W., Ninomiya Y., Sado Y., Weber M., Vogel W.F. DDRl-deficient mice show localized subepithelial GBM thickening with focal loss of slit diaphragms and proteinuria. Kidney Int. 2004; 66 (1): 102-111.Gross O., Beirowski B., Harvey S.J., McFadden C., Chen D., Tam S., Thorner P.S., Smyth N.,Addicks K., Bloch W., Ninomiya Y., Sado Y., Weber M., Vogel W.F. DDRl-deficient mice show localized subepithelial GBM thickening with focal loss of slit diaphragms and proteinuria. Kidney Int. 2004; 66 (1): 102-111.Hou G., Vogel W., Bendeck M.P. The discoidin domain receptor tyrosine kinase DDR1 in arterial wound repair. J Clin Invest. 2001; 107 (6): 727-735.Hou G., Vogel W., Bendeck M.P. The discoidin domain receptor tyrosine kinase DDR1 in arterial wound repair. J Clin Invest. 2001; 107 (6): 727-735.Kano K., Marin de Evsikova C., Young J., Wnek C., Maddatu T.P., Nishina P. M., Naggert J.K. A novel dwarfism with gonadal dysfunction due to loss-of-function allele of the collagen receptor gene, Ddr2, in the mouse. Мої Endocrinol. 2008; 22 (8): 1866-80.Kano K., Marin de Evsikova C., Young J., Wnek C., Maddatu T.P., Nishina P. M., Naggert J.K. A novel dwarfism with gonadal dysfunction due to loss-of-function allele of the collagen receptor gene, Ddr2, in the mouse. Мої Endocrinol. 2008; 22 (8): 1866-80.Bargal R., Cormier-Daire V., Ben-Neriah Z., Le Merrer M., Sosna J., Melki J., Zangen D.H., Smithson S.F., Borochowitz. Z., Belostotsky R., RaasRothschild A. Mutations in DDR2 gene cause SMED with short limbs and abnormal calcifications. Am J Hum Genet. 2009; 84(1): 80-4 doi.Bargal R., Cormier-Daire V., Ben-Neriah Z., Le Merrer M., Sosna J., Melki J., Zangen D.H., Smithson S.F., Borochowitz. Z., Belostotsky R., RaasRothschild A. Mutations in DDR2 gene cause SMED with short limbs and abnormal calcifications. Am J Hum Genet. 2009; 84(1): 80-4 doi.Asamitsu K., Tetsuka Т., Kanazawa S., Okamoto T. RING finger protein A07 supports NF-kappaB-mediated transcription by interacting with the transactivation domain of the p65 subunit. J Biol Chem. 2003; 278 (29): 26879-87 Epub 2003.Asamitsu K., Tetsuka Т., Kanazawa S., Okamoto T. RING finger protein A07 supports NF-kappaB-mediated transcription by interacting with the transactivation domain of the p65 subunit. J Biol Chem. 2003; 278 (29): 26879-87 Epub 2003.Rolland Т., Tasan М., Charloteaux B., Pevzner S.J., Zhong Q., Sahni N., Yi S., Lemmens I., Fontanillo C., MoscaR, KamburovA. etal. Aproteome-scale mapofthehumaninteractomenetwork.Cell. 2014; 159(5): 1212-26doi.Rolland Т., Tasan М., Charloteaux B., Pevzner S.J., Zhong Q., Sahni N., Yi S., Lemmens I., Fontanillo C., MoscaR, KamburovA. etal. Aproteome-scale mapofthehumaninteractomenetwork.Cell. 2014; 159(5): 1212-26doi.Unverdorben P., Beck F., SledzP., Schweitzer A., Pfeifer G., Plitzko J.M., Baumeister W., Forster F. Deep classification of a large cryo-EM dataset defines the conformational landscape of the 26S proteasome. Proc Natl Acad SciUSA.2014; 111 (15): 5544-9doi.Unverdorben P., Beck F., SledzP., Schweitzer A., Pfeifer G., Plitzko J.M., Baumeister W., Forster F. Deep classification of a large cryo-EM dataset defines the conformational landscape of the 26S proteasome. Proc Natl Acad SciUSA.2014; 111 (15): 5544-9doi.Parry M.A., Jacob U., Huber R., Wisner A., Bon C., Bode W. The crystal structure of the novel snake venom plasminogen activator TSV-РА: a prototype structure for snake venom serine proteinases. Structure. 1998; 6 (9): 1195-1206.Parry M.A., Jacob U., Huber R., Wisner A., Bon C., Bode W. The crystal structure of the novel snake venom plasminogen activator TSV-РА: a prototype structure for snake venom serine proteinases. Structure. 1998; 6 (9): 1195-1206.Патент КНР № CN104372054A: «The cod skin collagen source chelating peptide and its preparation method».Патент КНР № CN104372054A: «The cod skin collagen source chelating peptide and its preparation method».

The authors declare that there are no conflicts of interest present.